[发明专利]一种控制多肽穿过纳米孔速度的方法及其应用

权利要求书

1.一种测定多肽的电信号波形的方法，所述的电信号波形由所述多肽通过纳米孔传感器形成，其特征在于，包括以下步骤：

1）将多肽与核酸连接，获得核酸-多肽连接物；

2）在核酸酶的存在下，施加跨纳米孔的电压使所述核酸-多肽连接物通过纳米孔，通过核酸酶控制核酸的运动，进而控制所连接多肽穿过纳米孔的速度；

3）读取纳米孔电流信号，获得多肽的电信号波形，

其中，所述核酸为DNA，所述核酸与所述多肽共价键结合相连或通过连接基团相连形成核酸-多肽连接物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的核酸酶是解旋酶、聚合酶或转位酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述聚合酶为phi29聚合酶。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述解旋酶为Hel308家族解旋酶。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述解旋酶为Hel308 Tga或其变体的序列，Hel308 Mbu或其变体的序列，Hel308 Pfu或其变体的序列，Hel308Mma或其变体的序列，Hel308Mok或其变体的序列，Hel308Fac或其变体的序列，Hel308Csy或其变体的序列，Hel308Mhu或其变体的序列，或F8813蛋白或其变体的序列。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸为单链DNA。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸与所述多肽共价键结合相连方式选自通过肟键结合相连、通过酰胺键结合相连、通过硫醚键结合相连、通过二硫键结合相连、通过磷酰键结合相连、通过腙键结合相连、通过酰脲键结合相连、通过click反应形成的环结合相连。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纳米孔为生物纳米孔或固态纳米孔。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述生物纳米孔选自金黄色葡萄球菌α-溶血素纳米孔、MspA纳米孔、Csgg纳米孔、phi29纳米孔和FraC纳米孔。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述生物纳米孔为MspA纳米孔。

11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述固态纳米孔选自石墨烯纳米孔、氮化硅纳米孔、二氧化钛纳米孔、氧化铝纳米孔。

12.一种测定多肽的氨基酸序列的方法，其特征在于，通过测量所述多肽通过纳米孔传感器产生的电信号进行序列测定，所述的方法包括以下步骤：

1）将多肽与核酸连接，获得核酸-多肽连接物；

2）在核酸酶的存在下，施加跨纳米孔的电压使所述核酸-多肽连接物通过纳米孔，通过核酸酶控制核酸的运动，进而控制所连接多肽穿过纳米孔的速度；

3）读取纳米孔电流信号，对所述多肽的氨基酸序列的电流信号进行识别，

其中，所述核酸为DNA，所述核酸与所述多肽共价键结合相连或通过连接基团相连形成核酸-多肽连接物。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述的核酸酶是解旋酶、聚合酶或转位酶。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述聚合酶为phi29聚合酶。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述解旋酶为Hel308家族解旋酶。