[发明专利]一口血秋海棠的组培快速繁殖方法

权利要求书

1.一口血秋海棠的组培快速繁殖方法，其特征在于依次进行以下步骤：

1）、取材：

选择一口血秋海棠野生植株的叶片作为外植体；

2）、外植体消毒：

3）、外植体的愈伤组织的诱导和不定芽的分化：

以消毒后的外植体作为培养材料；

愈伤组织诱导培养基为：MS + TDZ 0.1 mg/l+ NAA 0.05 mg/l+蔗糖30 g/l + 6.9 g/l琼脂+0.8 g/l PVP，pH 5.8〜6.0；

愈伤组织的诱导和不定芽的分化的培养条件为：先黑暗培养1周；然后转入光照强度为30~35 µmol•m^-2•s^-1的12h光/12h暗交替培养1~2周；然后再转入光照强度为35~40 µmol•m^-2•s^-1的12h光/12h暗交替培养，当培养材料的愈伤组织分化形成由数量≥5个不定芽组成的丛生芽时，停止培养；

4）、不定芽的伸长生长

将步骤3）所得的丛生芽分成带有2~3个不定芽的小植株，然后转移到伸长培养基上进行伸长生长；

所述伸长培养基为：MS+BA 0.5 mg/l+ NAA0.05 mg/l+蔗糖 30 g/l + 琼脂6.9~7.0g/l + PVP 0.8 g/l，pH 5.8〜6.0；

所述伸长生长培养条件为：先于黑暗培养1周；然后转入光照强度为30~35 µmol•m^-2•s^-1的12h光/12h暗交替培养1周，然后再转入光照强度为 35~40 µmol•m^-2•s^-1的12h光/12h暗交替培养2~3周，停止培养；

5）、生根培养：

将步骤4）培养所得的幼苗转入生根培养基中进行生根培养；

生根培养的条件为：先在黑暗条件下培养1周；然后转入光照强度为30~35 µmol•m^-2•s^-1的12h光/12h暗交替培养1周，然后再转入光照强度35~40 µmol•m^-2•s^-1的12h光/12h暗交替培养2~3周，结束生根培养；

所述生根培养基为以下任意一种：

1/2MS+NAA 0.2~0.4 mg/l+蔗糖 20g/l+ 琼脂 7.3g/l + PVP 0.8g/l，pH 5.8〜6.0；

1/2MS+IBA 0.4〜0.6 mg/l+蔗糖 20g/l+ 琼脂 7.3g/l + PVP 0.8g/l，pH 5.8〜6.0；

所述步骤3）、步骤4）、步骤5）中：

黑暗培养的温度为23± 1 ℃；

光/暗交替培养时，黑暗培养的温度为23± 1 ℃，光照培养的温度为25± 1 ℃；

6）、移栽：

将步骤5）已生根的植株，移栽至基质上培养。

2.根据权利要求1所述的一口血秋海棠的组培快速繁殖方法，其特征在于：

所述步骤2）为：

以叶脉为中心线，切成长、宽各为1.5~2 cm的小块，得小叶片；

将小叶片进行消毒，得到消毒后小叶片；

所述步骤3）为：

先将消毒后小叶片的四周边缘各去除0.9~1.1mm，然后在叶脉处每间隔3~5 mm 进行切割，再将该叶片的远轴面贴在培养基表面作为培养材料。

3.根据权利要求1或2所述的一口血秋海棠的组培快速繁殖方法，其特征在于：

所述步骤6）的移栽为：将植株从培养瓶中取出置于自然环境下锻炼5~7天，然后打开瓶盖，在培养基表面浇水，再放置1~2 天后，将植株基部的琼脂洗净，将苗移栽到混合基质上培养20~35天，开始10~14天温度为22~24°C ，相对湿度为75〜85%；而后为自然温度和自然湿度。