[发明专利]一种微生物固定化小球及其制备方法与冷冻干燥方法和应用

权利要求书

1.一种微生物固定化小球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将海藻酸钠加入水中，灭菌后添加二氧化硅，搅拌混合均匀得混合液；

(2)将微生物菌悬液加入步骤(1)所得的混合液中搅拌均匀得包埋液；所述微生物菌悬液中的单菌为苯酚降解菌贪铜菌Cupriavidus oxalaticus，保藏编号为GDMCC NO：60668；

(3)将步骤(2)所得的包埋液加入氯化钙交联液中交联凝结成球，得到微生物固定化小球；

(4)将微生物固定化小球与干燥剂混合，所述干燥剂为氯化钙；

(5)将步骤(4)所得混合物置于冷冻条件下；

(6)将步骤(5)所得冷冻混合物取出以解冻干燥。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述海藻酸钠在混合液中的质量百分比为1％—5％，二氧化硅在混合液中的质量百分比为1％—2％。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述微生物菌悬液的制备包括以下步骤：挑选经过划线活化的单菌加入LB培养基中扩大培养得到菌液，待菌液浓度OD₆₀₀为1—1.5时，取菌液离心后弃上清取菌体，然后用生理盐水将菌体重悬，得微生物菌悬液；其中所述单菌为苯酚降解菌贪铜菌Cupriavidus oxalaticus；所述微生物菌悬液添加到步骤(1)混合液中的体积百分比为10％—50％。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述氯化钙在氯化钙交联液中的质量百分比为0.5％—5％；所述交联的时间为0.5h—1h。

5.由权利要求1-4任一项所述的制备方法制得的一种微生物固定化小球。

6.权利要求5所述的一种微生物固定化小球在处理苯酚废水中的应用。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述干燥剂与微生物固定化小球的质量比为1∶10—1∶5；微生物固定化小球与干燥剂混合后需迅速冷冻。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述冷冻的温度为-20℃—0℃；所述冷冻的时间为1h以上；步骤(6)中所述解冻条件为25℃—30℃，干燥时间为1-2h。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将微生物固定化小球与干燥剂混合后将所得混合物用布包裹再置于盛有干燥剂的容器中然后冷冻；所述干燥剂填充满容器底部；所述的干燥剂为无水氯化钙；所述布为渗透性好的纱布或者无纺布。