[发明专利]一种槐糖脂发酵液中异构产物的分离纯化方法

权利要求书

1.一种发酵法生产槐糖脂的产物分离纯化方法，包含以下步骤：

(1)使用工程菌发酵生产槐糖脂结束发酵后，用水稀释发酵液，之后分离菌体得到含槐糖脂的无菌液；

(2)无菌液通过树脂进行吸附，吸附结束后用洗脱剂对树脂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到酸型槐糖脂产品；所述的树脂选自大孔树脂、碱性阴离子树脂；

(3)收集经树脂吸附后的无菌液，加入絮凝剂，分离沉淀物和溶液，溶液除水，得到内酯型槐糖脂产品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)结束发酵后，用3-5倍体积水稀释发酵液，然后用过滤方式除菌体，得到无菌液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的树脂选自大孔树脂、碱性阴离子树脂，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂，所述碱性阴离子树脂为丙烯酸系弱碱性阴离子树脂；所述树脂的装填长径比为5：1-20：1；所述树脂的体积为待吸附无菌液总体积的1/50-1/10。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述树脂的装填长径比为8：1-10：1。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中无菌液进行吸附时，流量控制为每小时1-5倍树脂体积。

6.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中无菌液进行吸附时，流量控制为每小时2-3倍树脂体积。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中吸附结束后，用洗脱剂对树脂进行洗脱，碱性阴离子树脂的洗脱剂为浓度0.1-5wt％的氢氧化钠和/或氢氧化钾水溶液，大孔树脂的洗脱剂为乙醇。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，碱性阴离子树脂的洗脱剂为浓度0.5％-1.5wt％的氢氧化钠和/或氢氧化钾水溶液。

9.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，洗脱剂用量为20-50倍树脂体积，洗脱剂流量为每小时5-20倍树脂体积。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，洗脱剂流量为每小时8-10倍树脂体积。

11.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，步骤(2)中洗脱液用减压蒸发的方式进行浓缩，最终得到槐糖脂浓度为30-50wt％的酸型槐糖脂产品，酸型槐糖脂比例不低于98％。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)收集经树脂吸附后的无菌液，加入絮凝剂，静置待固体沉淀析出完毕后，分离沉淀物和液体，液体减压蒸发除去溶剂水，得到内酯型槐糖脂产品，内酯型槐糖脂比例不低于98％。

13.根据权利要求1或12所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的絮凝剂选自聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺、明胶、海藻酸钠中的一种或多种，絮凝剂加入的质量为经树脂吸附后的无菌液质量的0.1-1％。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，絮凝剂加入的质量为经树脂吸附后的无菌液质量的0.3-0.5％。

15.根据权利要求1、2、3、7、12中任一项所述的方法，其特征在于，酸型和内酯型槐糖脂总收率不低于92％。