[发明专利]一种黑蒜中不同分子量的类黑精成分的分离方法

权利要求书

1.一种黑蒜中不同分子量的类黑精成分的分离方法，其特征在于：步骤如下：

⑴黑蒜中类黑精成分的粗提取

称取黑蒜成品原料，无菌操作的条件下剥成蒜瓣；溶于无菌蒸馏水中，蒸馏水：蒜瓣的料液比为1：1.8～3，在胶体磨中打浆；得到的浆液再用蒸馏水在4℃下萃取，两次添加的蒸馏水的体积比为1：1；所得混合物以1.1×10⁴rpm离心15min；取上清液，过滤；将所得滤液通过二氯甲烷洗脱萃取脱脂，所述黑蒜成品原料：二氯甲烷的比例g：mL为1：1.25～1.5；

⑵超滤膜分离：取类黑精粗提取液，使用搅拌的超滤装置在室温下对其进行连续超滤，所述装置具有分子量截止值分别50、10和1kDa的再生纤维素分离膜，以获得不同分子量范围的组分，分别为分子量>50kDa的高分子量、分子量为10-50kDa的中等分子量和分子量<1kDa的低分子量；为了控制分离的效率，测量回收的滤液中的电导率直至它的值低于20μs.cm^-1；平均而言，对于每个膜孔径，以下程序重复10次：保留物截留的部分作为分子量>50kDa的高分子量物质回收，并且使所有滤液的体积恢复至类黑精粗提取液的原始体积后再使用10kDa截留膜进行新的超滤，使用1kDa对10kDa的滤液进行新的超滤；在该过程结束时，回收对应于50、10和1kDa渗余物的三个级分和对应于1kDa截留滤液的一个级分；

⑶冷冻干燥：液体部分将其在预先称重的容器中冷冻并冷冻干燥至达到稳定的重量后，储存于干燥器中用于进一步分析；冷冻干燥后所得产品为色泽不同的粉末；每部分的产量用以下分数权重计算分数方程式，结果以百分比报告；

组分萃取率％＝冻干部分(g)÷用于提取的黑蒜粉(g)×100 方程(1)；

⑷成分分析：比较分离到的各个组分的成分；利用公式1计算出不同分子量组分的产率；称量样品，测C、H、N、S的相对含量，结果以百分比报告；

⑸尺寸排阻色谱检测分离的各组分的分子量：分别称量不同分子量部分的类黑精冻干粉溶于0.1M的NaNO₃水溶液中，类黑精冻干粉：NaNO₃水溶液的比例mg：ml为5：1，置于37℃摇床震荡12h使其充分溶解；RI、RALS、LALS三检测器联用的尺寸排阻色谱，流动相为0.1M的NaNO₃水溶液，流速为0.7ml/min，色谱柱为A6000M，柱温为35℃；样品进样量为100μL；

⑹理化性质分析：利用紫外光谱、荧光光谱分析各组分的紫外吸收和荧光特性，确认分离到的各个组分为从黑蒜成品中提取分离到的类黑精成分。

2.根据权利要求1所述的黑蒜中不同分子量的类黑精成分的分离方法，其特征在于：所述步骤⑴中胶体磨为实验室胶体磨。

3.根据权利要求1所述的黑蒜中不同分子量的类黑精成分的分离方法，其特征在于：所述步骤中⑵中获得不同分子量范围的组分后，当通过膜后保留物的体积达到类黑精粗提取液1/5体积时，进行再加水至类黑精粗提取液的原始体积，并重复该过程数次。