[发明专利]一种表观遗传修饰的检测方法、试剂和应用

权利要求书

1.一种表观遗传修饰的检测方法，包括染色体状态检测和染色体甲基化检测，其特征在于：所述染色体状态检测包括，采用包埋有已知核酸序列的转座酶对染色体的开放区域进行攻击，然后，去除核小体，将染色体序列随机打断，形成文库，通过检测文库中是否带有包埋的已知核酸序列信息来区分染色体的状态为开放区域或非开放区域；

所述染色体甲基化检测包括，在将染色体序列随机打断时，采用包埋条形码序列的TN5酶将染色体序列随机打断，然后对随机打断的片段进行甲基化处理，通过高通量测序获得染色体的甲基化信息；并通过TN5酶包埋的条形码序列区分不同的细胞，实现多个细胞的染色体状态和甲基化信息的同时检测。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述包埋有已知核酸序列的转座酶为MuA酶。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述TN5酶中还包埋有条形码序列之外的功能序列，所述功能序列包括高通量测序平台的特异性接头序列。

4.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于：所述甲基化处理采用亚硫酸氢盐。

5.一种用于表观遗传修饰检测的试剂，其特征在于：包括包埋有已知核酸序列的MuA酶，包埋有条形码序列和高通量测序平台的特异性接头序列的TN5酶，以及线性扩增引物和建库引物；

所述MuA酶用于检测染色体状态；

所述TN5酶用于随机打断染色体序列；

所述线性扩增引物和建库引物用于高通量测序甲基化检测的测序文库构建，线性扩增引物用于对TN5酶打断后并经过甲基化处理的核酸片段进行预扩增，建库引物用于对预扩增产物进行PCR扩增，以用于后续高通量测序。

6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于：所述线性扩增引物为Seq ID No.1所示序列，所述建库引物的正反向引物分别为Seq ID No.2和Seq ID No.3所示序列。

7.根据权利要求5或6所述的试剂，其特征在于：还包括甲基化处理试剂、测序文库构建试剂、高通量测序试剂和核酸纯化试剂中的至少一种。

8.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法或权利要求5-7任一项所述的试剂在染色体开放性图谱绘制、作物表观修饰差异研究、胚胎发育表观遗传修饰研究、肿瘤发生表观机制研究、疾病潜在标志物预测或肿瘤异质性或分型研究中的应用。

9.一种检测染色体状态的方法，其特征在于：包括采用包埋有已知核酸序列的转座酶对染色体的开放区域进行攻击，然后，去除核小体，将染色体序列随机打断，形成文库，通过检测文库中是否带有包埋的已知核酸序列信息来区分染色体的状态为开放区域或非开放区域。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述包埋有已知核酸序列的转座酶为MuA酶。