[发明专利]一种用于检测羊吕氏泰勒虫的PCR引物、检测试剂及检测方法在审
| 申请号： | 201910587044.1 | 申请日： | 2019-07-01 |
| 公开（公告）号： | CN110283922A | 公开（公告）日： | 2019-09-27 |
| 发明（设计）人： | 廖承红;杨璐;韩谦;王金花;赵建国;黄良圆;陈静;李妙珍 | 申请（专利权）人： | 海南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6893 | 分类号： | C12Q1/6893;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/90 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 王欢 |
| 地址： | 570228 海南*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 泰勒虫 检测 荧光定量PCR检测 生物技术领域 引物特异性 假阳性率 检测试剂 上游引物 下游引物 灵敏度 扩增 引物 | ||
1.一种PCR引物，其特征在于，其上游引物如SEQ ID NO:1所示，下游引物如SEQ ID NO:2所示。
2.权利要求1所述的PCR引物在制备羊吕氏泰勒虫的检测试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测试剂为实时荧光检测试剂。
4.一种用于检测羊吕氏泰勒虫的实时荧光检测试剂，其特征在于，包括权利要求1所述的PCR引物。
5.根据权利要求4所述的实时荧光检测试剂，其特征在于，还包括FastStart TaqDNA聚合酶、dNTPs、反应缓冲液、SYBR Green I荧光染料和水。
6.根据权利要求4所述的实时荧光检测试剂，其特征在于，还包括阴性对照品和阳性对照品；所述阴性对照品为水，所述阳性对照品为包含羊吕氏泰勒虫18SrRNA基因的重组质粒。
7.一种羊吕氏泰勒虫的检测方法，其特征在于，用权利要求1所述的PCR引物对待测样品的基因组DNA进行实时荧光PCR扩增。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述实时荧光PCR扩增的程序为：
95℃预变性10min；
95℃保持10sec，62℃10sec，72℃保持15sec为一个循环；共45个循环；
反应结束后先加热至95℃，再降至65℃，然后以每秒1％的递增至95℃直至检测荧光信号得出扩增产物的熔解曲线。
9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述实时荧光PCR扩增的体系为：
2μL待测样品基因组DNA，10μL FastStart Essential DNA Green Master(2×)，1.2μL0.6μM的上游引物，1.2μL 0.6μM的下游引物，5.6μL dd H2O。
10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的判断方法为：
观察荧光曲线扩增情况：有荧光信号，且熔解曲线呈特异性单峰，表示结果为阳性，即待测样品中含吕氏泰勒虫；无荧光信号，或熔解曲线无特异性单峰，表示结果为阴性，即待测样品中不含吕氏泰勒虫。
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