[发明专利]一种十字花科根肿病鉴定方法

说明书

本发明公开了一种十字花科根肿病鉴定方法，属于根肿病鉴定方法技术领域，具体包括以下步骤：将十字花科植株采用育苗袋栽培方法进行育苗；待植株长出一片真叶后采用注射法将根肿菌菌液注射至植株根部；植株生长期间，对植株喷洒营养液；待植株根部发病，进行根肿病抗病性鉴定；本发明鉴定方法采用育苗袋法栽培、注射法接菌，操作简单且植株发病率、病情指数最高，鉴定方法精确。

技术领域

本发明属于根肿病鉴定方法技术领域，具体涉及一种十字花科根肿病鉴定方法。

背景技术

根肿病是威胁十字花科植物的一种世界性土传病害，该病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae Woronin)侵染十字花科根部，引起薄壁组织细胞大量分裂增殖且增大，进而根部逐渐形成肿瘤。根肿病专性寄生十字花科，我国主要种植的十字花科作物为大白菜，小白菜，结球甘蓝，萝卜，菜心等，根肿病的发生对十字花科作物造成非常严重的危害。

目前，国内外对根肿病的研究越来越多，无论是抗病育种，还是根肿菌生理小种的鉴定，都需要对植株做根肿病性状调查。而目前国内外都是采用传统的基质栽培方法，这种方法在采样，性状调查时存在不易清洗，根部有基质残留，需要耗费大量的时间等问题。尤其是在大田清洗根部的污水无处排放，根肿菌的休眠孢子存活时间又长达20年，这样会造成根肿菌污染的土地面积越来越多，对十字花科作物的危害也愈发严重。

根肿病鉴定过程中有效的接菌方法有很多，目前国内外报道的方法有，插入法(Strelkov et al，2007)，菌土法(丁云花等，2005；胡靖峰等，2010)，注射法(Donald etal，2009)，浸根法(李茜等，2012)，浸芽法等(Cao et al，2009)，这些接菌方法有着各自的优缺点，到目前为止尚未形成统一稳定的接菌方法。

随着根肿病在国内外的发病面积越来越大，病情也越来越重，对根肿菌的研究是迫在眉睫的任务，而这些研究大多数都需要做根肿病性状调查。为此，建立一个根肿病快速、精准鉴定方法是非常重要的，这样可以大大减轻试验造成的污染，减少人力物力的浪费，从而为根肿菌的研究减轻更多的工作负担。

发明内容

本发明提供了一种十字花科根肿病鉴定方法，解决了传统方法不易清洗，根部有基质残留，耗时长且结果准确性差的问题，本发明是通过如下技术方案来实现的。

本发明目的是提供一种十字花科根肿病鉴定方法，包括以下步骤：

将十字花科植株采用育苗袋栽培方法进行育苗；待植株长出一片真叶后采用注射法将根肿菌菌液注射至植株根部；植株生长期间，对植株喷洒营养液；待植株根部发病，进行根肿病抗病性鉴定；

所述育苗袋栽培方法为将十字花科植株采用陶粒、沙子和珍珠岩混合基质，并配以喷洒营养液，进行育苗。

优选地，所述育苗袋栽培方法具体包括以下步骤：

把灭完菌的由泥炭、蛭石和珍珠岩混合组成的基质A装到育苗袋中，将基质喷水慢慢润湿，待基质水分吸收后将种子播到基质中，待种子发芽后，把植株定植到花盆中，花盆内装有灭完菌的粒径分别为8～15mm的陶粒、沙子和珍珠岩按质量比0.9～1.1:0.9～1.1:1组成的基质B，植株生长期间喷洒营养液，以防幼苗干枯。

优选地，所述注射法具体为：用移液器将菌液接菌到植株根部，每株的根肿菌悬浮液接菌量为1×10⁵～1×10⁸个孢子。

更优选地，所述根肿菌悬浮液是由以下方法制得：

取发病根瘤用清水洗净，室温下进行活化；在活化好的发病根瘤中加入无菌水，所述发病根瘤：无菌水用量比为2～4g：10mL，并用破壁磨菌机粉碎2～3次，过滤，合并滤液，充分摇匀；用血细胞计数板检测摇匀后滤液中根肿菌孢子浓度，并根据检测出的浓度用无菌水稀释至1×10⁵～1×10⁸个孢子/mL，制得根肿菌悬浮液。