[发明专利]复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用

说明书

本发明属于中药注射液质量控制方法技术领域，具体涉及复方苦参注射液1H‑NMR指纹图谱的构建方法及应用。复方苦参注射液1H‑NMR指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：(1)获取复方苦参注射液1H‑NMR初级代谢物指纹图谱A；(2)获取复方苦参注射液1H‑NMR次级代谢物指纹图谱B；(3)对复方苦参注射液1H‑NMR初级代谢产物指纹图谱A和次级代谢产物指纹图谱B进行指认和鉴定，确定指纹图谱A和B的特征峰；复方苦参注射液1H‑NMR指纹图谱的应用，用于复方苦参注射液的质量检测。本发明建立的复方苦参注射液的1H‑NMR指纹图谱，能同时表征复方苦参注射液中21种初级代谢物和次级代谢物，弥补了HPLC指纹图谱对部分成分无法检测的缺陷。

技术领域

本发明属于中药注射液质量控制方法技术领域，具体涉及复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用。

背景技术

复方苦参注射液收载于卫生部药品标准第14册，标准编号为WS₃-B-2752-97，是由苦参和白土苓两味药提取精制而成的，具有清热利湿、凉血解毒、散结止痛的作用，主要用于癌性疼痛的出血，亦可用于抗肿瘤、镇痛、增强免疫等。

复方苦参注射液含有多种化学成分，但卫生部药品标准(WS₃-B-2752-97)只规定了苦参碱的含量测定方法。2010年6月23日公开的200910244324.9号国家专利中，报道了有关复方苦参注射液的质量控制方法，建立了复方苦参注射液的HPLC指纹图谱。另外，已有文献建立了同时测定复方苦参注射液中苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱含量的方法。上述方法尽管有许多优点，但检测指标均为复方苦参注射液的次级代谢物。然而，复方苦参注射液中还含有大量的初级代谢物，其含量远远高于次级代谢物，对复方苦参注射液的质量控制有较大影响。使用上述方法进行检测时，常用的色谱柱在分离过程中会损失极性较大的水溶性成分，因此HPLC指纹图谱方法检测不到复方苦参注射液的初级代谢物。综上，为提高复方苦参注射液的质量，确保临床合理安全应用，需建立一种全面有效地表征复方苦参注射液化学组成的指纹图谱，实现对复方苦参注射液产品的全面质量控制。

发明内容

本发明针对HPLC指纹图谱方法检测不到复方苦参注射液的初级代谢物的问题提供了一种能够全面有效地表征复方苦参注射液化学组成的复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法及应用。

为达到上述目的本发明采用了以下技术方案：

复方苦参注射液1H-NMR指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

(1)取复方苦参注射液，蒸干，取干粉溶解于TSP重水溶液中得到混合溶液，将混合溶液做离心处理后，取上清液于核磁管中，进行核磁共振仪测试，使用核磁数据处理软件对谱图进行处理，获得复方苦参注射液1H-NMR初级代谢物指纹图谱A；

(2)取复方苦参注射液，加入等体积的乙酸乙酯反复萃取2-3次，合并萃取液，将合并后的萃取液蒸干，将留下的干粉溶解于重水溶液中得到混合溶液，将混合溶液做离心处理后，取上清液于核磁管中，使用核磁共振仪测试，并用核磁数据处理软件对谱图进行处理，获得复方苦参注射液1H-NMR次级代谢物指纹图谱B；

(3)对复方苦参注射液1H-NMR初级代谢产物指纹图谱A和次级代谢产物指纹图谱B进行指认和鉴定，利用标准品对照结合指纹图谱A和B中的核磁共振信号的化学位移、峰形及偶合常数，进行分析，确定指纹图谱A和B的特征峰；

指纹图谱A的特征峰为：苏氨酸、醋酸、脯氨酸、琥珀酸、胆碱、甘氨酸、乳糖、蔗糖、β-D-葡萄糖、α-D-葡萄糖、尿苷、延胡索酸、羟嘌呤醇、次黄嘌呤和甲酸盐；

指纹图谱B的特征峰为：苦参碱、N-甲基金雀花碱、氧化苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、大泽米苷。

进一步，所述步骤(1)中所取的复方苦参注射液为0.5-2mL。