[发明专利]改进的FIX融合蛋白、缀合物及其应用

权利要求书

1.一种缀合物，其中亲水聚合物分子连接至融合蛋白的C末端，

所述融合蛋白为凝血因子IX(FIX)的融合蛋白，其由凝血因子IX活性部分以及与其连接的延长半衰期的融合伴侣(FP)组成，所述凝血因子IX活性部分为全长人凝血因子IX，所述融合伴侣为全长、截短或变体形式的免疫球蛋白Fc区段；

其中所述凝血因子IX活性部分与所述融合伴侣通过第一接头L1连接，所述凝血因子IX活性部分连接于所述第一接头L1的N端，所述融合伴侣连接于所述第一接头L1的C端；

所述第一接头L1包含柔性肽段和刚性单元；

所述柔性肽段为(GS)_m(GGS)_n(GGGS)_o(GGGGS)_p，其中m、n、o和p分别选自0至50的整数，m、n、o和p不同时为0；

所述刚性单元包含选自以下的氨基酸序列：

VAPPPALPAPVRLPGPA(SEQ ID NO:3)；

VAPPPALPAVAPPPALPA(SEQ ID NO:4)；

VAPPPALPAVAPPPALPAVAPPPALPAPVRLPGPA(SEQ ID NO:5)；

VAPPPALPAPVRLPGPAVAPPPALPAVAPPPALPA(SEQ ID NO:6)；和

VAPPPALPAVAPPPALPAGSVAPPPALPAVAPPPALPA(SEQ ID NO:7)；

其中所述亲水聚合物分子为聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量为20-40kD。

2.权利要求1的缀合物，其中所述亲水聚合物分子的分子量是40kD。

3.权利要求1的缀合物，其中所述凝血因子IX活性部分包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

4.权利要求1的缀合物，其中所述第一接头L1选自：

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVAPPPALPAPVRLPGP A(SEQ ID NO:8)；

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVAPPPALPAVAPPPALP A(SEQ ID NO:9)；

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVAPPPALPAVAPPPALP AVAPPPALPAPVRLPGPA(SEQ ID NO:10)；

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVAPPPALPAPVRLPGP AVAPPPALPAVAPPPALPA(SEQ ID NO:11)；和

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSVAPPPALPAVAPPPALP AGSVAPPPALPAVAPPPALPA(SEQ IDNO:12)。

5.权利要求1的缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区段是来自于IgG、IgA、IgD、IgE或IgM的Fc区段。

6.权利要求5的缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc区段是为IgG Fc区段。

7.权利要求6的缀合物，其中所述IgG Fc区段具有降低的ADCC效应和/或CDC效应和/或与FcRn受体增强的结合亲和力。

8.权利要求1的缀合物，其中所述融合伴侣还与包含Sortase酶识别位点的一段氨基酸序列P直接连接或者通过第二接头L2连接，所述Sortase酶是Sortase A或Sortase B。

9.权利要求8的缀合物，其中所述氨基酸序列P包含Sortase A的核心识别位点LPXTG，其中X是任意氨基酸。

10.权利要求8的缀合物，其中所述第二接头L2为(GS)w(GGS)x(GGGS)y(GGGGS)z，其中w、x、y和z分别选自0至50的整数，w、x、y和z不同时为0。