[发明专利]一种磷霉素氨丁三醇原料药及其制剂中有关杂质的高效液相色谱分离测定方法及应用

权利要求书

1.一种磷霉素氨丁三醇原料药及其制剂中有关杂质的高效液相色谱分离测定方法，用于同时分离分子式为的杂质A、分子式为的杂质B、分子式为的杂质C和分子式为的杂质D；采用氨丙基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，其特征在于：

以示差检测器检测，温度15～50℃；以20～100mmol/L磷酸盐缓冲液为流动相A，以甲醇-乙腈为流动相B，按流动相A与流动相B的体积比为80:20～65:35的比例混合为流动相，流动相流速为0.8～1.2mL/min；色谱柱温度为20～40℃；进样量1-500μl；具体包括如下步骤：

(1)、按以下配比进行溶液配制：

1)、系统适用性溶液制备：

取磷霉素氨丁三醇原料药或其制剂0.3g，用水10～300μl使润湿，置40～80℃加热12～36小时，加流动相溶解并稀释至10～50ml，摇匀，作为溶液A；

另取磷霉素氨丁三醇原料药或其制剂0.3g，用溶液A溶解并稀释至2.5～10ml，作为系统适用性溶液；

2)、供试品溶液制备：

按临用新制，取磷霉素氨丁三醇原料药或其制剂适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释成每lml中含磷霉素氨丁三醇60～240mg的溶液，作为供试品溶液；

3)、对照溶液制备：

精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释至含磷霉素氨丁三醇相当于供试品溶液质量比浓度为0.3～0.5％的溶液，作为对照溶液；

(2)测定法：

精密量取系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液各1～100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；采用主成分自身对照法计算磷霉素氨丁三醇原料药中的杂质A、杂质B、杂质C、杂质D四个有关物质及其他可能的已知或未知杂质的含量；

所述流动相B中甲醇-乙腈的体积比为75：25～50：50。

2.根据权利要求1所述的磷霉素氨丁三醇原料药及其制剂中有关杂质的高效液相色谱分离测定方法，其特征在于，所述氨丙基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱选自：

规格为5μm、4.6×250mm的Agilent Zorbax NH₂，

规格为3μm、4.6×150mm的Agilent Zorbax NH₂，

规格为5μm、4.6×250mm的Waters Spherisorb NH₂，

规格为3μm、4.6×150mm的Waters Spherisorb NH₂，

规格为5μm、4.6×250mm的Osaka Soda Capcell Pak NH₂，

规格为3μm、4.6×150mm的Osaka Soda Capcell Pak NH₂，

规格为5μm、4.6×250mm的Phenomenex Luna-NH₂，

规格为3μm、4.6×150mm的Phenomenex Luna-NH₂，

或者柱效相当的色谱柱中的一种。

3.一种采用权利要求1-2中任一权利要求所述分离测定方法对磷霉素氨丁三醇原料药中分子式为的杂质A、分子式为的杂质B、分子式为的杂质C和分子式为的杂质D进行分离制备，以形成杂质对照品的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括分步收集所述杂质A、杂质B、杂质C、和杂质D，并进行脱盐和冷冻干燥的步骤。