[发明专利]一种能够表征ITP疗效的免疫球蛋白及其用于制备检测ITP试剂的应用

说明书

本发明公开了肌球蛋白反应性免疫球蛋白重链可变区MRIgHV（uniprot登录号：Q9UL89）和一种未知蛋白（免疫球蛋白重链的恒定区γ3类似物,IHCGγ3‑like）（uniprot登录号：Q6N030）作为表征ITP疗效的生物标记物的应用。发明人研究发现，MRIgHV和IHCGγ3‑like蛋白含量与ITP存在相关性。其作用机理为：这两种蛋白属于免疫球蛋白，具有内肽酶活性，参与免疫应答，补体激活，蛋白激活级联和报告基因介导的内吞作用，这两种蛋白质与免疫反应高度相关，可以作为ITP诊断的标志物。

技术领域

本发明涉及生物标记物，具体地说，涉及肌球蛋白反应性免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白重链的恒定区γ3类似物两种蛋白作为ITP疗效评价的生物标记物的应用。

背景技术

免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia , ITP），是一种自身免疫性出血性疾病，以血小板减少、骨髓巨核细胞数正常或增多伴成熟受阻，以及缺乏任何原因包括外源的或继发性因素为特征，是临床最常见的一种血小板减少性疾病。目前公认发病机制与体液免疫、细胞免疫功能异常有关，即由于患者体内的自身抗体与血小板结合，致敏的血小板被单核巨噬细胞系统过度破坏。除体液免疫机制外，细胞免疫和调节性细胞也在其中起着非常重要的作用。ITP发病率较低，但死亡率却较高，成人发病率为5/10 万～10/10万，育龄期女性发病率高于男性，60岁以上老年人是该病的高发群体 。

ITP诊断没有“黄金指标”，主要依赖于排除其他血液学异常引起的自身血小板减少性疾病。其检验指标除作血常规外，需查血小板计数，观察血小板形态，促凝血时间，血块收缩时间，血小板表面相关免疫球蛋白(PAIg)测定，抗人免疫球蛋白试验，补体测定，毛细血管脆性试验，骨髓象检查等，操作繁琐，耗时费力。

生物标记物(biomarker)是近年来随着免疫学和分子生物学技术的发展而提出的一类与细胞生长增殖有关的标志物。生物标记物不仅可从分子水平探讨发病机制，而且在准确、敏感地评价早期、低水平的损害方面有着独特的优势，可提供早期预警，很大程度上为临床医生提供了辅助诊断的依据。

免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig）指具有抗体（Antibody, Ab）活性或化学结构，与抗体分子相似的球蛋白。Ig是由两条相同的轻链和两条相同的重链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链又称H链，由可变区（VH）和恒定区（CH）组成。根据H链恒定区内氨基酸组成排列顺序的不同可将Ig的重链分为五种，即γ、α、δ、μ和ε链。相对于已知五种Ig来说，其分布对应关系如下：IgG（γ），IgA（α），IgD（δ），IgM（μ）和IgE（ε）。H链上可变区上有抗原结合点。而Ig恒定区既具有Ig分子骨架支撑功能，又是激活免疫反应的部位之一。Ig的主要功能是特异性地结合抗原，膜免疫球蛋白是B细胞膜上的抗原受体，能特异性识别抗原分子。Ig能激活补体；结合细胞表面的Fc受体，表现出不同的生物学作用，如调理作用、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用、介导Ⅰ型超敏反应；对免疫应答有正调节和负调节作用。所有抗体的化学基础都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不都具有抗体活性。

发明内容

肌球蛋白反应性免疫球蛋白重链可变区（Myosin-reactive immunoglobulinheavy chain variable region，MRIgHV）属于参与抗原识别的免疫球蛋白重链可变结构域的V区。免疫球蛋白重链恒定区γ3类似物（ Immunoglobulin heavy constant gamma 3like，IGHGγ3-like）属于免疫球蛋白重链的恒定区。经Gene Ontology（GO）分析发现，这两种蛋白均具有免疫球蛋白典型结构，并具有内肽酶活性，参与免疫应答，补体激活，蛋白激活级联和报告基因介导的内吞作用，均与免疫反应高度相关。但与ITP发表是否相关未见报道，本发明人在ITP蛋白质数据挖掘中发现，MRIgHV和IGHGγ3-like具有差异显著特性，因此可以作为ITP疗效评价的标志物。

本发明的目的是提供一组ITP疗效评价的生物标记物。