[发明专利]黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法

权利要求书

1.一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：建立黄芪不同极性部位的UPLC指纹图谱，标定特征峰，利用谱效数学模型分析并辨识黄芪中化学成分的利水消肿活性部位；

具体步骤如下：

（1）采用系统溶剂萃取法制备黄芪的不同极性组分：黄芪系统萃取前进行预处理：黄芪粉碎，精密称取4份粗粉，每份200g，分别依次加入10倍和8倍量的蒸馏水回流提取，合并2次水煎液真空浓缩至1 mg/mL即可；

系统溶剂萃取法制备黄芪的不同极性组分的方法具体为：依次使用3倍量有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对黄芪浓缩液进行萃取，分别得到黄芪石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、剩余水四个不同极性部位；回收溶剂、真空干燥，即得不同极性组分的干燥部位；

（2）采用UPLC-Q-Exactive技术建立黄芪不同极性部位的指纹图谱：建立黄芪不同极性部位的指纹图谱的色谱条件为：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱，流动相A为含0.1%甲酸的水，B为乙腈，体积流量0.3 μL/min；UV检测波长254 nm；柱温30℃；进样量3 μL；洗脱梯度为：0-10 min 99-92% B, 10-15 min, 92-80% B, 15-21 min, 80-75% B, 21-24min, 75-70% B, 24-27 min, 70-65% B, 27-30 min, 35-40% B, 30-33 min, 60-30% B,33-36 min, 70-99% B, 36-38 min, 99% B, 38-40 min, 99-1% B；质谱条件：采用HESI离子化方式，喷雾电压正极3.5 kV，负极2.5 kV，碰撞能量为12.5、25、37.5 eV；加热器温度300℃，毛细管温度320℃，辅助气体积流量10 arb，鞘气体积流量35 arb；采集模式为正负离子切换，扫描模式采用Full Scan/dd-MS2，采集范围为m/z 100～1500；分辨率采用 MSFull Scan 35000 FWHM，MS/MS 17500 FWHM；

（3）标定特征峰，提取特征峰数据；

（4）对不同极性部位进行24 h尿蛋白定量与生化指标的体内药效测定；

（5）将指纹图谱特征峰数据和药效活性数据经灰色关联度分析辨识黄芪中化学成分的药效活性成分；

将步骤三所得特征峰数据和步骤四所得的药效学数据代入谱效数学模型进行分析，采用灰色关联度分析方法，评价各特征峰所代表的化学成分对药效活性的贡献大小；

其中：所述灰色关联度分析方法包括如下步骤：

（1）参考序列与比较序列的选择：以黄芪不同极性部位4个药物的28个特征峰作为比较数列即子序列，构成28个子序列记为 [X_i(k)]，以阿霉素肾病大鼠药效学指标24 h尿蛋白含量、ALB、BUN、CK、SCr、TCHO、TG、TP作为母序列记为 [X₀(k)]，根据母序列与子序列关联度的大小，来确定各成分含量对药效贡献的大小；

（2）关联系数计算：[X_i(k)]与[X₀(k)]的关联系数εi(k)由下列公式计算：；k 为不同极性部位黄芪；X_i为不同极性黄芪的特征峰；εi(k)为第k个不同极性部位黄芪的子序列Xi与母序列X0的关联系数；分别为母序列与子序列绝对差最大、最小值，记为△max、△min；为母序列与子序列的绝对差值，记为△i(k)；ρ为分辨系数，ρ取值区间为(0,1)，取ρ= 0.5；

所述利水消肿活性部位的化学成分为：紫檀烷、Calycosin-7-O-glc-6-O-acetate、黄芪皂苷 I、紫檀苷、Formononetin-7-O-glc-6-O-acetate、红车轴草素-7-O-葡萄糖、异黄烷、异黄烷苷、黄芪皂苷 II、异黄芪皂苷 I、黄芪皂苷 III、黄芪甲苷、Kumatakenin、Dihydroxy-dimethoxy isoflavone和Dihydroxy-trimethoxy DHIF。