[发明专利]Etelcalcetide的合成方法

说明书

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及Etelcalcetide的合成方法。本发明采用β‑S(Trt)‑D‑Arg(Boc)3‑OH为原料，并且以半胱氨酸替代肽序中的丙氨酸，采用NCL(自然化学连接)方法进行偶联反应，本发明针对现有液相方法的不足进行了改进，根据这条肽肽序的独有特点，采用S到N的分子内迁移反应完成偶联，从而提高肽片段间的偶联效率，本专利方法总收率为71.3％。因此，本发明克服了传统偶联试剂作用下片段间偶联困难的缺陷，降低了生产成本，并且适合规模化生产。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及Etelcalcetide的合成方法。

背景技术

Etelcalcetide是由AMGEN INC开发的一种新颖的拟钙剂，主要用于慢性 肾病成人患者做血液透析治疗的继发性甲状旁腺功能亢进的多肽药物。2017 年2月07日在美国上市，商品名为Parsabiv。Etelcalcetide的主链有七个D-型氨 基酸组成，侧链通过一个二硫键与L-半胱氨酸相连。其肽序如式I所示：

Etelcalcetide采用固相偶联需要使用树脂，规模化生产受到限制。而且偶 联时氨基酸通常需要过量(3-5当量)，Etelcalcetide又以昂贵的D型氨基酸 为主，因此，采用固相合成方法，成本过高，规模化生产受到限制。

专利CN106928321及WO2016154580A1氨基酸之间偶联均采用传统的 偶联试剂(PyBop，HATU，DIC或EDC等)进行活化偶联，但该方法用于 片段之间的偶联效率通常较低，造成收率过低。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种Etelcalcetide的合成方法。该方法采用S到N 的分子内迁移反应完成偶联，从而提高肽片段间的偶联效率，总收率为71.3％。 克服了传统偶联试剂作用下片段间偶联困难的缺陷，降低了生产成本，并且 适合规模化生产。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了Etelcalcetide的合成方法，以β-S(Trt)-D-Arg(Boc)3-OH为 原料，用半胱氨酸替代肽序中的丙氨酸，采用NCL方法进行偶联反应，制得 Etelcalcetide。

具体包括如下步骤：

步骤1：以β-S(Trt)-D-Arg(Boc)₃-OH和苯硫酚(PhSH)为原料，在溶剂 存在的条件下经偶联反应获得化合物1；

步骤2：以Ac-D-Cys(Acm)-OH与HONb为原料，在溶剂存在的条件下 经偶联剂活化，与H-Ala-OH脱水缩合获得化合物2；

步骤3：以化合物2和苯硫酚(PhSH)为原料，在溶剂、偶联剂存在的 条件下经缩合反应获得化合物3；

步骤4：以Boc-D-Cys(Trt)-OH、H-D-Arg(Pbf)-NH₂·HCI为原料，在溶剂、 偶联剂存在的条件下经缩合反应获得二肽片段即化合物4；

步骤5：化合物4在裂解液存在的条件下经去保护基反应获得化合物5；

步骤6：以化合物5与化合物1为原料，在溶剂、缓冲溶液、TCEP和三 氟乙醇存在的条件下，经NCL反应，裂解获得化合物6；

步骤7：以化合物6与化合物1为原料，在溶剂、缓冲溶液、TCEP和三 氟乙醇存在的条件下，经NCL反应，裂解获得化合物7；

步骤8：以化合物7与化合物1为原料，在溶剂、缓冲溶液、TCEP和三 氟乙醇存在的条件下，经NCL反应，裂解获得化合物8；