[发明专利]一种利用番茄叶片建立高效再生系统的方法

权利要求书

1.一种利用番茄叶片建立高效再生系统的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，种子处理：

番茄种子在75％酒精中浸泡1min，灭菌水清洗3次，饱和磷酸钠溶液浸泡20min，灭菌水清洗3次，1％次氯酸钠溶液浸泡10min，灭菌水清洗5～7次；

步骤2，无菌苗的培养：

处理后的种子接种到MS培养基，置于培养箱中，26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养，待子叶长出后，剪取大小为1cm²子叶；

步骤3，愈伤组织分化培养：

将剪取的子叶叶面正面向下接于愈伤组织分化培养基MS+2mg/LIAA+1.5mg/LZT+2mg/LAgNO₃，在培养箱中26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养，两周更换一次培养基，直到愈伤组织形成；

步骤4，芽诱导分化培养：

待愈伤组织形成后，将愈伤组织切成0.5×0.5cm小块，转移到芽诱导分化培养基MS+1.5mg/LZT+1mg/LIAA，在培养箱中26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养，两周更换一次培养基；

步骤5，壮苗培养：

待每个愈伤组织上分化出5～10个芽后，将生长良好的丛芽分成单芽，接种于壮苗培养基MS+1mg/LIAA，培养瓶每瓶接入4～6个单芽，在培养箱中26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养；

步骤6，生根培养：

当芽长到2～3cm时，切芽并将其转入生根培养基MS+1mg/LIAA+0.75mg/L ZT，在培养箱中26℃光照培养16h/18℃黑暗培养8h交替培养；

步骤7，驯化炼苗：

番茄组培苗在生根培养基中植株高度达4～5cm时，打开培养瓶盖子，加入0.5～1cm的蒸馏水，培养箱中炼苗2d，然后将组培苗取出，洗去根部培养基残渣，将幼苗移栽至营养基质，头三天覆盖塑料薄膜保湿，在室温下炼苗一周，期间补充稀释10倍的MS营养液一次，一周后可将幼苗移栽到大田，其中营养基质为有机肥、珍珠岩、蛭石的混合土，按照重量比2:1:1混合。