[发明专利]一种基于催化反应原位荧光检测无机焦磷酸酶的方法

权利要求书

1.一种基于催化反应原位荧光检测无机焦磷酸酶的方法，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，多巴胺、间苯二胺和铜离子发生原位荧光反应发出绿色的荧光，加入焦磷酸根离子后，出现荧光淬灭的现象；加入无机焦磷酸酶、焦磷酸根离子和镁离子的混合作用溶液后，出现荧光增强的现象；通过荧光分光光度计和紫外可见分光光度计进行测试，记录其荧光光谱和吸收光谱，从而实现无机焦磷酸酶的定量检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于催化反应原位荧光检测无机焦磷酸酶的方法，其特征在于：Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为50mM，间苯二胺的浓度为200μM，铜离子的浓度为20μM，多巴胺的浓度为200μM，焦磷酸根离子的浓度为200μM，无机焦磷酸酶的浓度为10mU/mL，镁离子的浓度为200μM，孵化温度为37℃，孵化时间为30min，原位荧光反应时间为40min，激发波长为435nm，发射波长为535nm，通过荧光分光光度计和紫外可见分光光度计进行测试，记录其荧光光谱和吸收光谱。

3.根据权利要求1所述的一种基于催化反应原位荧光检测无机焦磷酸酶的方法，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，多巴胺、间苯二胺和铜离子发生原位荧光反应发出绿色的荧光，加入焦磷酸根离子后，出现荧光淬灭的现象；加入无机焦磷酸酶水解焦磷酸根离子后，出现荧光增强的现象；加入无机焦磷酸酶、焦磷酸根离子、镁离子和NaF混合溶液后，由于NaF能抑制无机焦磷酸酶的活性，使得焦磷酸根离子不能被水解，从而造成焦磷酸根和铜离子耦合，多巴胺和间苯二胺的原位荧光反应不能有效发生，通过荧光分光光度计进行测试，记录其荧光光谱，从而实现无机焦磷酸酶抑制剂的定量检测。

4.根据权利要求1所述的一种基于催化反应原位荧光检测无机焦磷酸酶的方法的应用，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，加入一定量的血清，多巴胺、间苯二胺和铜离子发生原位荧光反应发出绿色的荧光，加入焦磷酸根离子后，出现荧光淬灭的现象；加入无机焦磷酸酶、焦磷酸根离子和镁离子混合溶液后，出现荧光增强的现象；通过荧光分光光度计进行测试，记录其荧光光谱，从而实现在复杂环境中对无机焦磷酸酶的定量检测。