[发明专利]用于鉴定义乌小鲵的多重PCR引物、试剂盒、方法、应用

权利要求书

1.一种用于鉴定义乌小鲵的多重PCR引物，其特征在于，所述多重PCR引物包括SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示的第一引物对，以及包括SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的第二引物对。

2.一种用于鉴定义乌小鲵的多重PCR试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的多重PCR引物。

3.根据权利要求2所述的用于鉴定义乌小鲵的多重PCR试剂盒，其特征在于，所述多重PCR试剂盒还包括10×扩增缓冲液、dNTP、MgCl₂、Taq聚合酶、双蒸水中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的用于鉴定义乌小鲵的多重PCR试剂盒，其特征在于，所述多重PCR试剂盒还包括模板DNA，所述模板DNA为义乌小鲵的基因组DNA。

5.一种鉴定义乌小鲵的方法，其特征在于，包括：

提取待鉴定样品的基因组DNA；

以所述基因组DNA为模板DNA，采用权利要求1所述的多重PCR引物对所述模板DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；

将所述扩增产物进行凝胶电泳，根据扩增条带分析结果，若所述扩增条带为906bp和417bp的二条带时，则判断所述待鉴定样品为来自义乌小鲵的样品。

6.根据权利要求5所述的鉴定义乌小鲵的方法，其特征在于，采用所述多重PCR引物对所述模板DNA进行PCR扩增时，PCR反应体系的体积为10μL～50μL，包括1.5mmol/L～3.0mmol/L的MgCl₂，0.10mmol/L～0.40mmol/L的dNTP，0.05μmol/L～0.40μmol/L的所述第一引物对，0.05μmol/L～0.40μmol/L的所述第二引物对，0.5U～1.5U的Taq聚合酶，0.1μL～2μL的所述模板DNA，1μL～5μL的10×扩增缓冲液，余量为双蒸水。

7.根据权利要求5所述的鉴定义乌小鲵的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应过程包括预变性，所述预变性的温度为94℃～98℃，时间为2min～5min。

8.根据权利要求7所述的鉴定义乌小鲵的方法，其特征在于，在所述预变性之后，依次进行变性、退火和延伸，循环25次～40次，其中，所述变性的温度为94℃～98℃、时间为10s～40s，所述退火的温度为50℃～63℃、时间为20s～45s，所述延伸的温度为68℃～72℃、时间为20s～60s。

9.根据权利要求8所述的鉴定义乌小鲵的方法，其特征在于，在变性、退火和延伸的循环结束之后，还在72℃延伸3min～10min。

10.一种根据权利要求1所述的多重PCR引物或权利要求5～9任一项所述的方法在鉴定义乌小鲵中的应用。