[发明专利]一种可注射性抗菌肽水凝胶及其制备方法

说明书

本发明涉及抗菌水凝胶领域，特别是指一种可注射性抗菌肽水凝胶及其制备方法。解决了现有多肽水凝胶的特异性抗菌效果差、不能实现可注射、毒副作用大的问题。所述水凝胶经抗菌肽自组装制备而得。本发明以小分子抗菌肽为原料，抗菌肽能够破坏微生物膜，产生抗菌效果，因此不需要添加抗菌药物；以自组装机制制备水凝胶，不需要添加交联剂，且自组装能够在几分钟内完成。制备的水凝胶强度适中，且展现出剪切变稀效应，具有可注射性，能够适用于深层组织。制备的水凝胶具有较好的抗菌性能。

技术领域

本发明涉及抗菌水凝胶领域，特别是指一种可注射性抗菌肽水凝胶及其制备方法。

背景技术

上世纪70年代，水凝胶抗菌敷料开始被欧美国家研制。相比于传统敷料，水凝胶敷料含水量较高，因此伤口不会结痂，愈合更快。水凝胶敷料主要成分是有机及高分子材料，因此在体内容易降解，易于排出。目前市面上的水凝胶敷料多是通过具有抗菌性的高分子或抗菌剂与高分子结合的技术制备，其抗菌性能主要来自于高分子基体或抗菌剂。

抗菌肽是自然界中由生物有机体产生，用于抵抗细菌感染的活性分子。近年来，抗菌肽在伤口抗菌领域得到了广泛研究，文献表明抗菌肽具有广谱的抗菌活性和良好的生物相容性。随着检测技术以及蛋白质、多肽筛选技术的发展，越来越多抗菌肽的结构信息被科学家解析。研究表明抗菌肽通常具有典型的结构特征：1)富含疏水氨基酸，如 Leu（亮氨酸）、IIe (异亮氨酸)、Val (缬氨酸)、Phe (苯丙氨酸) 和Trp (色氨酸)等；2）包含大量的阳离子氨基酸，使多肽显正电性（+2—+9）；3）具有两亲性结构。

分子自组装是分子利用分子间作用力（氢键作用、静电作用、疏水作用、超分子作用等）自行聚集、组织成规则结构的现象。多肽是由氨基酸按照一定的连接顺序，通过肽键结合而成，因此可以通过调节多肽中氨基酸种类和排列来调控自组装行为。

专利CN201310517751.6，公开了一种包埋抗菌肽分子的医用水凝胶敷料及其制备方法，采用现有技术中化学合成或者采用基因工程的方法使用生物反应器将含有人源肽基因的载体在细胞中表达出人源肽，分离纯化可得；专利CN201811594955.9也公开了一种抗菌肽、抗菌肽水凝胶及其制备方法，主要应用于保持伤口局部湿润，保护新生肉芽组织不受损伤的外用药膜。水凝胶的应用不仅限于外用敷料，水凝胶有益的性能如果能实现可注射，则将带来更广大的应用前景。

发明内容

本发明提出一种可注射性抗菌肽水凝胶及其制备方法，解决了现有多肽水凝胶的特异性抗菌效果差、不能实现可注射、毒副作用大的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种可注射性抗菌肽水凝胶，所述水凝胶经抗菌肽自组装制备而得。

所述抗菌肽序列为Ac-RKKWFW-NH₂。

所述的可注射性抗菌肽水凝胶的制备方法步骤如下：

（1）抗菌肽的制备

以Rink amide-AM树脂为固相载体，按顺序加入氨基酸原料，以DMF为溶剂，在催化剂的作用下，利用固相合成技术，制备抗菌肽，纯化后得纯度≥95%的抗菌肽。

（2）水凝胶的制备

取步骤（1）制备的纯度≥95%的抗菌肽，加入蒸馏水超声溶解，制得抗菌肽水溶液，然后逐滴加入NaOH水溶液调pH，充分混合，直至形成水凝胶。

所述步骤（1）中催化剂为1-羟基苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐和二异丙基乙胺的混合物。

所述步骤（1）中氨基酸原料为以9-芴甲氧羰基保护的L型氨基酸。

所述以9-芴甲氧羰基保护的L型氨基酸为Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-Arg(Pbf)-OH。