[发明专利]一种QuEChERS-三重四级杆串联质谱检测虾肉中4种硝基呋喃代谢物残留的方法

说明书

本发明公开了一种QuEChERS‑三重四级杆串联质谱检测虾肉中4种硝基呋喃代谢物残留的方法，本方法以QuEChERS方法处理样品，结合三重四级杆串联质谱法检测，包括以下步骤：标准溶液配制，采用样品基质液配制混合标准曲线溶液；水解、衍生化，均质匀浆样品，2‑硝基苯甲醛和盐酸衍生，避光保存16h；提取净化，衍生液经5％甲酸乙腈振荡提取后，采用QuEChERS方法净化，液相色谱‑质谱联用仪检测，内标法定量。本发明以QuEChERS净化代替了传统的液液萃取，克服了液液萃取中pH和蛋白易乳化的影响，不仅能够有效去除虾肉基质中的其他杂质，且回收率、重复性、灵敏度和检出限均满足国标的要求，具有快速，简便，高效，廉价和环保等特点。

技术领域

本发明涉及兽药残留检测技术领域，具体涉及一种QuEChERS-三重四级杆串联质谱检测虾肉中4种硝基呋喃代谢物残留的方法。

背景技术

中国是全球对虾养殖的第一大生产国，近几年我国的出口虾类产品保持较快的增长幅度，但是遭到官方机构通报的情况也相对增加，尤其是硝基呋喃类药物残留超标最为普遍。硝基呋喃属于典型的合成广谱抗生素药物，广泛用于家畜家禽及水产品等动物的疾病预防和控制，研究表明该类药物具有致癌性和诱变性，包括中国在内的多个国家，明确禁止使用硝基呋喃类药物。但由于其价格低廉，药用性好，在全球范围内仍存在非法使用的现象。

目前，硝基呋喃类药物代谢物常用的分析检测法主要为液相色谱-串联质谱法(LC-MS)；LC-MS法具有准确性高、检出限低、测定速度快、干扰少等优点。但是前处理技术发展较为缓慢，若样品前处理提取不好，会对检测产生较大的干扰。目前，硝基呋喃类药物代谢物前处理主要为液液萃取法和固相萃取法，这些方法不仅成本高，试剂消耗量大，容易造成环境污染，而且操作繁琐。国家标准《农业部783号公告-1-2006》采用乙酸乙酯液液萃取操作过程中呋喃类成分受pH值变化的影响较大；同时对于虾肉等蛋白质含量较高的样品在萃取后容易发生乳化现象，需要再除蛋白，使前处理的操作更加繁琐复杂。

发明内容

(一)解决的技术问题

本发明提供一种QuEChERS-三重四级杆串联质谱检测虾肉中4种硝基呋喃代谢物残留的方法以改进的QuEChERS法对样品进行提取净化，结合三重四级杆串联质谱检测虾肉中4种硝基呋喃代谢物残留，具有快速简便，环保廉价的特点。

(二)技术方案

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种QuEChERS-三重四级杆串联质谱检测虾肉中4种硝基呋喃代谢物残留的方法，包括以下步骤：

一种QuEChERS-三重四级杆串联质谱检测虾肉中4种硝基呋喃代谢物残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配制标准品

称取四种标准品及其内标10mg置10mL容量瓶中，分别用甲醇溶解稀释定容；再分别准确移取适量的单一标准储备液与用甲醇稀释成浓度为100ng/mL的混合标准溶液，及100ng/mL混合内标工作溶液；

(2)样品前处理

样品充分均质匀浆，称取2g，置于50mL洁净的离心管中，加入20μL混合内标工作溶液，加入0.2mol/L盐酸5mL和0.05mol/L和2-硝基苯甲醛0.15mL避光保存16h；16h后取出，再加入5％甲酸乙腈5mL，振荡数秒，加入NaCl 4g，涡旋混匀样品，8000r/min离心5min，取含PSA 50mg、C₁₈ 100mg的上清液于净化管中，涡旋混匀样品，10000r/min离心1min，取1mL过0.22μm滤膜，上机分析；

(3)标准工作曲线配置

分别准确吸取100ng/mL混合标准溶液置于5、10、20、50、100、500μL于50mL离心管中，除不加样品外按步骤(2)测定；