[发明专利]一种组织工程瘢痕皮肤模型的制备方法

说明书

本发明属于组织工程技术领域，提出了一种组织工程瘢痕皮肤模型的制备方法，将瘢痕组织脱细胞真皮基质蛋白、瘢痕成纤维细胞与鼠尾胶原通过组织工程皮肤培养得到组织工程皮肤，包括以下步骤：S1.提取瘢痕组织脱细胞真皮基质蛋白；S2.提取瘢痕成纤维细胞；S3.将步骤S1得到的瘢痕组织脱细胞真皮基质蛋白、步骤S2得到的瘢痕成纤维细胞、鼠尾胶原混合培养；S4.培养一周后，加入表皮干细胞，培养至形成组织工程皮肤。通过上述技术方案，解决了现有技术中缺乏合适的人体瘢痕模型的问题。

技术领域

本发明属于组织工程技术领域，涉及一种组织工程瘢痕皮肤模型的制备方法。

背景技术

瘢痕是由于真皮中细胞外基质(ECM)成分累积，导致真皮结构改变和功能受损。皮肤受到损伤后，伤口凝血级联被激活，随后招募炎症早期免疫细胞，免疫细胞促进创面抗炎杀菌的同时，诱导血管生成和纤维化组织发生。在此过程中成纤维细胞被激活并转化为肌成纤维细胞，肌成纤维细胞分泌大量I型胶原等细胞外基质，此后转变为瘢痕并促进伤口愈合。

ECM的组成和结构对于维持组织的功能有重要作用，其围绕细胞、是细胞与外界交流的分子支架和连接通道，如蛋白多糖可保持组织的机械性能、形态；纤维蛋白可与生长因子结合并通过与细胞表面受体结合影响细胞行为。除此之外，弹性蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白和胶原是瘢痕组织中的主要成分。成纤维细胞激活转变为肌成纤维细胞后快速增殖并分泌大量细胞外基质，细胞外基质过度累积和病理性重塑，改变细胞微环境和组织的机械强度，引起慢性炎症的持续发生，进一步激活更多的肌成纤维细胞，形成恶性循环，最终导致细胞功能失调、组织病变。

实际上，人体内的每个器官都会受到生理和病理性纤维化反应的影响，但是目前，临床对于纤维化疾病的治疗方法有限。只有针对用于肺纤维化的两种药物，吡非尼酮和nintedanib，而对于众多瘢痕患者并没有可以用于治疗的药物。主要在于其发病机制复杂，涉及到多种分子机制，单一药物不能起到很好的治疗效果。究其原因，主要在于瘢痕分子机制不够明确，且瘢痕研究多基于各种动物模型，其治疗药物在用于人体时达不到与动物模型一样的效果。合适的人体瘢痕模型缺乏，严重阻碍了瘢痕分子机制研究以及治疗药物筛选。

发明内容

本发明提出一种组织工程瘢痕皮肤模型的制备方法，解决了现有技术中缺乏合适的人体瘢痕模型的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种组织工程瘢痕皮肤模型的制备方法，将瘢痕组织脱细胞真皮基质蛋白、瘢痕成纤维细胞与鼠尾胶原通过组织工程皮肤培养得到组织工程皮肤。

作为进一步的技术方案，包括以下步骤：

S1.提取瘢痕组织脱细胞真皮基质蛋白；

S2.提取瘢痕成纤维细胞；

S3.将步骤S1得到的瘢痕组织脱细胞真皮基质蛋白、步骤S2得到的瘢痕成纤维细胞、鼠尾胶原混合培养，得到人工真皮；

S4.加入表皮干细胞，培养至形成组织工程皮肤。

作为进一步的技术方案，所述瘢痕组织脱细胞真皮基质蛋白的浓度为5.8mg/mL，其在所述组织工程皮肤中的终浓度为2.5mg/ml，所述瘢痕成纤维细胞的细胞浓度为1×10⁶个/mL。

作为进一步的技术方案，所述提取瘢痕成纤维细胞具体为从瘢痕皮肤细胞中利用组织块法提取瘢痕成纤维细胞。

作为进一步的技术方案，步骤S1具体包括以下步骤：

S11.将瘢痕皮肤在中性蛋白酶中消化过夜；

S12.分离瘢痕皮肤真皮和表皮；

S13.将步骤S12得到的分离后的瘢痕皮肤真皮组织放入脱细胞溶液中，4℃浸泡过夜；