[发明专利]一种表达猪塞内卡病毒VP2基因的重组杆状病毒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种重组杆状病毒，其特征在于，其包含一个或多个拷贝的猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述VP2蛋白的编码基因的序列如SEQ ID NO.5所示。

2.根据权利要求1所述的重组杆状病毒，其特征在于，所述猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因的5’端连接有GP64信号肽序列，3’端连接有His标签肽序列。

3.根据权利要求2所述的重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒含有如SEQ IDNO.8所示的序列。

4.根据权利要求1～3任一项所述的重组杆状病毒，其特征在于，所述猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因在P10启动子的控制下转录。

5.一种重组杆状病毒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因进行密码子优化，获得序列如SEQ ID NO.5所示的VP2蛋白的编码基因；

(2)在序列如SEQ ID NO.5所示的VP2蛋白的编码基因的5’端和3’端分别连接GP64信号肽和His标签肽，得到如SEQ ID NO.8所示的序列，将如SEQ ID NO.8所示的序列与转移载体连接，构建携带一个或多个拷贝的VP2蛋白编码基因的重组转移载体；

(3)将所述重组转移载体转入大肠杆菌DH10Bac，构建携带一个或多个拷贝的VP2蛋白编码基因的重组杆粒；

(4)将所述重组杆粒导入昆虫细胞，获得重组杆状病毒。

6.权利要求1～4任一项所述的重组杆状病毒在制备猪塞内卡病毒的抗原、抗体或亚单位疫苗中的应用。

7.一种猪塞内卡病毒亚单位疫苗，其特征在于，其包含猪塞内卡病毒VP2蛋白，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述猪塞内卡病毒VP2蛋白为采用权利要求1～4任一项所述的重组杆状病毒或采用权利要求5所述的制备方法制备得到的重组杆状病毒表达得到。

8.一种猪塞内卡病毒亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，利用重组杆状病毒表达猪塞内卡病毒VP2蛋白；所述重组杆状病毒包含一个或多个拷贝的猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因；所述VP2蛋白的编码基因为经密码子优化得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因的5’端连接有GP64信号肽序列，3’端连接有His标签肽序列；所述重组杆状病毒含有如SEQ ID NO.8所示的序列。

10.根据权利要求8或9所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)构建携带所述猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因的重组杆状病毒；

(2)将所述重组杆状病毒导入昆虫细胞，培养导入所述重组杆状病毒的昆虫细胞，表达猪塞内卡病毒VP2蛋白；

(3)分离和纯化VP2蛋白；

(4)将经纯化的VP2蛋白与佐剂混合，制备亚单位疫苗。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述构建携带所述猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因的重组杆状病毒包括如下步骤：

(1)将VP2蛋白的编码基因进行密码子优化，获得序列如SEQ ID NO.5所示的VP2蛋白的编码基因；

(2)在序列如SEQ ID NO.5所示的VP2蛋白的编码基因的5’端和3’端分别连接GP64信号肽和His标签肽，得到如SEQ ID NO.8所示的序列，将如SEQ ID NO.8所示的序列与转移载体连接，构建携带一个或多个拷贝的VP2蛋白编码基因的重组转移载体；

(3)将所述重组转移载体转入大肠杆菌DH10Bac，构建携带一个或多个拷贝的VP2蛋白编码基因的重组杆粒；

(4)将所述重组杆粒导入昆虫细胞，获得所述重组杆状病毒。