[发明专利]一种表面经过修饰的磁珠及其制备方法以及定量检测相关抗原的应用

权利要求书

1.一种表面经过修饰的磁珠，其特征在于，所述磁珠表面连接有修饰基团，所述修饰基团选自芳香羧酸基团、芳香酸酐基团或芳香酰卤基团。

2.根据权利要求1所述的磁珠，其特征在于，所述修饰基团具有式I～式III所示结构：

其中，Y选自羟基、氯、溴、碘；R₁和R₂独立的选自氢、C₁～C₈的直链或支链烷基、R₃O-或R₃选自氢、C₁～C₈的直链或支链烷基，n为1～6。

3.根据权利要求1所述的磁珠，其特征在于，所述磁珠选自胺基磁珠、羟基磁珠或巯基磁珠。

4.一种如权利要求1～3任意一项所述的表面经过修饰的磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将磁珠与修饰化合物混合，在有机溶剂和有机碱存在条件下进行反应，得到经过表面修饰的磁珠；

所述修饰化合物具有式IV～式VI所示结构：

其中，Q选自羟基、氯、溴、碘，Y选自羟基、氯、溴、碘；R₁和R₂独立的选自氢、C₁～C₈的直链或支链烷基、R₃O-或R₃选自氢、C₁～C₈的直链或支链烷基，n为1～6。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述修饰化合物选自1,2,4-偏苯三酸酐、1,2,4-偏苯三酸酐酰氯、1,2,4-偏苯三酸酐酰溴、对苯二甲酸、对苯二甲酰氯、对苯二甲酰溴、2-甲基对苯二甲酸、2-甲基对苯二甲酰氯、2-甲基对苯二甲酰溴、2,6-二甲基对苯二甲酸、2,6-二甲基对苯二甲酰氯、2-羟基对苯二甲酸、2-甲氧基对苯二甲酸或2-甲氧基对苯二甲酰氯。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲酰基环己胺、二甲基亚砜或四氢呋喃；

所述有机碱选自三乙胺、二异丙基乙胺、三丙胺、三异丙基胺、三丁胺、吡啶、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶或N,N’-二甲基哌嗪；

所述磁珠表面与修饰化合物进行反应的表面官能团与修饰化合物的摩尔比为1:20～1:800；

所述反应的温度为25±5℃，所述反应的时间为8～24小时。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，进行反应时，还包括缩合助剂，所述缩合助剂选自二环己基碳二酰亚胺、二异丙基碳二酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1,1’-羰基二咪唑、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯、O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、4-二甲胺基吡啶、羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑；

所述缩合助剂以缩合助剂的溶液的形式加入反应体系中，在所述缩合助剂的溶液中，所述缩合助剂的浓度为10～200mg/mL，溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲酰基环己胺、二甲基亚砜或四氢呋喃，所述缩合助剂的溶液的用量为每毫克表面经过修饰的磁珠50～1000μL的缩合助剂的溶液。

8.一种偶联抗体的磁珠在化学发光免疫分析中作为固相捕获或分离抗原中的应用，其特征在于，所述偶联抗体的磁珠为权利要求1～3任一项所述的磁珠经过活化后与蛋白或抗体偶联得到。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述蛋白或抗体的浓度为0.2～5mg/mL，所述偶联过程所用的溶液为pH5.0、100mM的MES缓冲液，反应温度为25℃，反应时间为8～36小时。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述活化为采用缩合试剂进行活化，所述缩合试剂选自二环己基碳二酰亚胺、二异丙基碳二酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1,1’-羰基二咪唑、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯、O-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、4-二甲胺基吡啶、羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。