[发明专利]抗肿瘤多肽及其在抗肿瘤领域的应用

说明书

本发明公开了抗肿瘤多肽及其在抗肿瘤领域的应用。本发明提供了一种多肽，为如下1)‑4)中任一种：1)包括氨基酸序列是序列表中序列1所示多肽；2)氨基酸序列是序列表中序列1所示的多肽；3)在1)或2)的N端或/和C端连接标签得到的融合多肽；4)将1)或2)所示的多肽经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有抗肿瘤功能的多肽。本发明提供了一种能有效杀伤细胞的多肽片段，具有很低的IC₅₀值，同时与含有hTERT启动子的肿瘤特异表达载体连接，使多肽片段能在肿瘤细胞特异高效表达并杀伤肿瘤细胞。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及抗肿瘤多肽及其在抗肿瘤领域的应用。

背景技术

抗肿瘤多肽(Anticancer Peptides,ACPs)是一类由几十个氨基酸残基组成，具有两亲性(亲水性与疏水性)并带正电荷的短肽，具有杀伤肿瘤细胞的活性。因其具有毒副作用小、不易产生耐药和免疫反应低等显著优点，已成为抗肿瘤药物研究的热点之一。抗肿瘤多肽数据库CancerPPD(http://crdd.osdd.net/raghava/cancerppd/)上收集的具有抗肿瘤活性的多肽已有3491种，涉及21种组织和249种肿瘤细胞系，部分ACPs已经进入临床试验。

抗肿瘤多肽作用于细胞的最主要方式是裂解细胞膜。天然抗肿瘤肽Polybia-MPI、铃蟾肽、合成肽BTM-P1等都是以膜裂解的方式作用于多种肿瘤细胞。以膜裂解的方式杀死细胞作用时间短，且多肽不需要进入到细胞内，不易产生耐药。另一种作用方式是破坏线粒体膜从而引发线粒体途径诱导的细胞凋亡。Eliassen等人发现牛乳铁蛋白肽LFcinB通过破坏线粒体膜诱导神经胶质瘤细胞凋亡，并在异体移植的小鼠体内得到验证。豹毒素则通过作用于线粒体，激活caspase3而诱导鳞状细胞癌细胞凋亡。还有一种有趣的作用方式是激活细胞的免疫反应，多肽LTX-315能使细胞发生免疫原性死亡，并能产生一种持续的长久效应可防止再次发生同一种肿瘤的恶化。

天然抗肿瘤肽存在一些明显的缺陷，比如溶血性高，肿瘤细胞特异性识别能力不强，所以天然抗肿瘤肽的应用受到很大的限制。基因治疗的概念在1972年由Frideman和Roblin首先提出，它以改变生物遗传物质为基础，目前被广泛应用于多种疾病的治疗。

基因治疗的生物靶向主要包括病毒载体靶向、受体结合型靶向和阳离子脂质体载体等几种方法。病毒载体靶向是利用具有双亲性的桥连分子协助腺病毒和逆转录病毒载体靶向转导，也可以通过编码病毒衣壳蛋白或包膜蛋白的操纵子进而实现其基因序列的改变，产生带有结构不同的表面蛋白的病毒微粒，来实现靶向基因转移；受体介导基因转移常见于非病毒基因的转移，是利用细胞膜表面存在的受体特异性识别其相应的配体，待二者结合后通过内吞作用，将结合于配体的目的基因或载基因质粒定向导入肿瘤细胞内；阳离子脂质体对带负电荷的DNA有很好的结合能力，可以很好地结合目的基因，并且在其包裹目的基因后，可以保护目的基因免受溶酶体等的降解。由于这些生物靶向载体的靶向性并不是根据肿瘤细胞的特性设计的，所以在肿瘤治疗上并没有明显优势，而利用肿瘤特异性启动子设计的靶向载体可以很好地弥补这一不足。端粒是位于真核生物染色体线性DNA分子末端的结构，在染色体末端呈膨大颗粒状，由一段重复的非转录序列与多种蛋白结合共同组成，其作用是保持染色体完整性及控制细胞周期。端粒的延长或缩短受端粒酶调节，端粒酶的活性随细胞分化而被抑制。近年来，端粒酶在细胞永生化和癌症发生中所起的作用引起了广泛关注，在永生化细胞系和85％以上的人肿瘤组织中都呈现高表达，而在大多数正常体细胞中未见表达，从而使得端粒酶作为肿瘤特异性标记物成为肿瘤基因治疗的新靶点。

发明内容

为了能够有效杀伤细胞，且构建能在肿瘤细胞中特异表达并杀死肿瘤细胞、对机体安全的非病毒的重组质粒，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供了一种多肽，为如下1)-4)中任一种：

1)包括氨基酸序列是序列表中序列1所示多肽；