[发明专利]一种水仙花诱导培养基及其应用

说明书

本申请公开了本发明提供一种水仙花诱导培养基，主要包括MS培养基，NAA，蔗糖，琼脂，人参提取物。制备方法为将原料混合后，调节pH5.8,121℃高温灭菌30min得到培养基。本发明提供的培养基，包含对维持水仙花快速生长因子，用于水仙花诱导成愈伤组织，在10天以内可以形成愈伤组织。

技术领域

本发明涉及生物技术及工程领域，特别涉及一种水仙花诱导培养基及其应用方法。

背景技术

新花卉作物对一个国家的花卉产业发展至关重要。开发利用我国现有野生花卉资源，是培育我国具有自主知识产权新花卉品种的重要途径。水仙花为报春花科(Primulaceae)报春花属球花报春组植物。水仙花的花序为淡蓝紫色头状花序，开花时花球繁多，观赏性很强。其花期一般为12月至翌年2月，是我国野生报春花资源中难得的冬季开花种类，其植株生长旺盛且周年常绿，是一种极具开发潜力的的园林植物材料。在水仙花的实生引种驯化中，发现其实生苗中有白花变异植株出现。而通过分株繁殖的速度过于缓慢，无法达到尽快稳定其优良性状进而实现该种新品种选育的目的。为此，为能尽快实现水仙花优良单株的稳定快繁，有必要对其组织培养快繁技术进行研究。

目前水仙花的诱导培养中，一般使用的是MS培养基+NAA+IBA的诱导培养基，这种培养基总的来说，生长速度还是很慢，形成愈伤组织的时间达到15天以上，难以达到快速培养生长的目标。

发明内容

本发明的目的是提供一种水仙花诱导培养基，用于提高增殖效率。解决目前水仙花诱导培养基增殖缓慢，提高其增殖速度。

本发明的目的是这样实现的：一种水仙花诱导培养基，包括如下组分：1LMS培养基的基础上加入NAA0.1-0.3mg，蔗糖25-35g，琼脂5-8g，人参提取物0.4-0.6mg。

本发明的优选方案：在1LMS培养基的基础上加入NAA0.2mg，蔗糖30g，琼脂6g，人参提取物0.5mg。

水仙花诱导培养基的制备方法，将上述各原料混合后，调节pH5.8,121℃高温灭菌30min，得到水仙花诱导培养基。

本发明中人参提取物的制备方法如下：

a、将人参干燥粉碎后加入5%乙醇水溶液于50-60℃热回流浸提40-60分钟，并过滤，得浸提液；乙醇水总质量为干燥粉碎后的人参重量的10倍；

b、将上述浸提液用乙醚进行萃取，得萃取液；

c、将上述萃取液用聚乙二醇5000柱进行柱层析，再用浓度为5-10%的乙醇水溶液洗脱，得第一级洗脱液；

d、将上述第一级洗脱液用100目聚酰胺粉作为吸附剂进行层析，再用3%醋酸水溶液洗脱，得第二级洗脱液；

e、将上述第二级洗脱液用乙醇进行重结晶，干燥后，即得所述人参提取物。

本发明得到的培养基在水仙花诱导培养中的应用。

本发明提供的水仙花诱导培养基，MS培养基，提供基本矿物质和碳源，氮源等物质；NAA，提供基本矿物质和碳源，氮源等物质；蔗糖，提供碳源；琼脂，提供固定基质；人参提取物，提供芽部生长激素。本发明提供的一种水仙花诱导培养基，包含对维持水仙花快速生长因子，用于水仙花诱导成愈伤组织，在10天以内可以形成愈伤组织。

具体实施方式

下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。实验所用器具仪器试剂皆可通过商业途径获得。

人参提取物的提取：

a、将人参干燥粉碎后加入5%乙醇水溶液于50℃热回流浸提40分钟，并过滤，得浸提液；乙醇水总质量为干燥粉碎后的人参重量的10倍；

b、将上述浸提液用乙醚进行萃取，得萃取液；