[发明专利]一种含有Atoh7和/或Pou4f的组合物、其制备方法及医药用途

说明书

本发明公开了一种含有Atoh7和/或Pou4f的组合物、其制备方法及医药用途。以病毒作为载体，通过在人或动物视网膜穆勒细胞内过表达以下转录因子：1)Atoh7+Pou4f2、或2)Atoh7+Pou4f3、或3)Atoh7+Pou4f1、或4)Atoh7、Pou4f1、Pou4f2、Pou4f3的任意单体中的一种或上述组合之外的其它组合，可将穆勒细胞定向分化为视网膜神经节细胞(RGCs)。通过应用本发明组合物再生的RGCs能迁移到神经节细胞层，整合到局部神经网络，具有正常RGC的形态和功能，并连接到不同的大脑区域。这些RGCs表达正常神经节细胞的各种特异性标记，具有和体内正常RGCs相似的电生理等活性。本发明组合物可以使体内的RGCs再生，可以应用于青光眼等神经疾病细胞替代治疗等方面。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种治疗眼部疾病的药物领域。

背景技术

青光眼(glaucoma)是导致人类失明的三大致盲眼病之一，是一组以视乳头萎缩、视野缺损和视力下降为共同特征的疾病。全球数据显示青光眼的发病率40-80岁高达3.54％，并处于一种上升趋势，到2040年可能达到1.12亿人[1]。在中国，青光眼在总人群中的发病率为2.59％，2050年病人数可达到2500万人[2]。青光眼按病因可分为原发性、继发性和先天性青光眼三大类，其最常见病因是各种因素引起房水循环障碍导致的眼压增高，但眼压升高并不是唯一的危险因素，也并非所有的青光眼都有高眼压症状。青光眼的治疗以药物和手术手段促进房水循环、降低眼压、神经保护为主要方式。

从细胞水平分析致病机理，青光眼会导致视网膜神经节细胞(retinal ganglioncell,RGC)渐进性的、不可逆的死亡。RGC是唯一的负责将视觉信号从视网膜传输到大脑的细胞，其轴突汇集成负责信号传导的视神经。含有感光色素的一类RGC(ipRGCs)还有调节生物钟的功能。RGC的死亡导致视乳头萎缩和视力下降，但现在的药物和手术治疗只能延缓RGC的死亡速度，并不能逆转恢复RGC的数量。

基于干细胞的细胞替代治疗正成为研究的热点。根据干细胞的来源的不同，细胞替代治疗有两种方式。第一种方式是细胞移植，即移植体外来源的异体或自体干细胞或其分化的细胞。自体来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)和诱导神经干细胞(induced neural stem cell，iNSC)具有自身免疫原性低、能无限扩增、能分化为各种神经细胞等特性，是非常理想的移植细胞来源。但细胞移植尚处于早期实验阶段，有很多技术困难有待克服，最主要的难点是移植细胞很难整合到视网膜，因此距离临床应用还有很大的空间。

细胞替代治疗的第二种方式是利用体内组织干细胞的原位再生。很多组织器官如皮肤、小肠、肺等拥有很多干细胞，具有很强的组织再生功能。大脑、视网膜等神经组织再生能力较弱，但也拥有类似干细胞功能的胶质细胞，从而维护组织的完整性和正常功能。视网膜穆勒细胞已经被证明可以在体内诱导分化为不同的神经细胞等，并整合到组织中修复部分损伤。

(1)体外分化RGC和细胞移植

青光眼及其它视神经病变代表了一类RGC轴突病变和胞体逐渐死亡的疾病。由于缺乏体内的再生功能，不能生成替代的RGC及其轴突，导致永久的视力减退乃至失明。多能干细胞和诱导多能干细胞为治疗这类疾病提供了新机遇。一种思路是利用移植细胞提供神经营养因子以保护体内的RGC。例如，移植到玻璃体腔的人胎儿视网膜前体细胞能对RGC起到神经保护作用[3]。移植的间充质干细胞虽然不能整合到视网膜，但减少了高眼压导致的RGC死亡，对RGC同样具有很好的保护作用[4]。