[发明专利]一种检测降钙素原电化学催化协助的自增强光电化学免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种检测降钙素原电化学催化协助的自增强光电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）滴加4 ~ 6 μL、0.1% (w/v)、含1%醋酸的壳聚糖溶液于多孔纳米阵列BiVO₄/CuS电极表面，继续滴加4 ~ 6 μL、2.5% (v/v)的戊二醛溶液于修饰电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗；

其中多孔纳米阵列BiVO₄/CuS的制备采用在电沉积煅烧的多孔纳米阵列BiVO₄上原位生长CuS；

2）滴加8 ~ 12 μL的捕获抗体降钙素原Ab₁溶液于修饰电极表面，4℃冰箱中晾干，超纯水冲洗；

3）滴加3 ~ 5 μL、1%的牛血清蛋白溶液于修饰电极表面，4℃冰箱中晾干，超纯水冲洗；

4）滴加8 ~ 12 μL、50 fg/mL ~ 100 ng/mL的降钙素原抗原标准溶液于修饰电极表面，4℃冰箱中晾干，超纯水冲洗；

5）滴加8 ~ 12 μL的降钙素原抗体标志物孵化物聚苯乙烯微球@Ab₂溶液于修饰电极表面，4℃冰箱中孵化60 min，超纯水冲洗电极表面，制得一种检测降钙素原的电化学催化协助的自增强光电化学免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种检测降钙素原电化学催化协助的自增强光电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述多孔纳米阵列BiVO₄/CuS电极的制备步骤如下：

取0.03 ~ 0.05 mol的KI溶于50 mL超纯水中，超声20 min后，0.03 ~ 0.05 mol Bi(NO₃)₃·5H₂O加入上述溶液；搅拌30 min后，用硝酸调节pH值到1.68，取0.4 ~ 0.6 g的对苯醌溶于20 mL无水乙醇中，超声30 min后，加入上述溶液得到深棕色溶液；将大小为2.0 ×0.8 cm²的ITO导电玻璃插入上述深棕色溶液，进行电沉积，得到电沉积多孔纳米阵列BiOI电极；取6 ~ 8 µL、0.4 mol/L VO(acac)₂的二甲基亚砜溶液滴加到BiOI电极，将其在马弗炉中450℃煅烧120 min，冷却后，将电极浸入1 mol/L的NaOH去除V₂O₅，超纯水洗涤电极三次，制得电沉积煅烧的多孔纳米阵列BiVO₄电极；将BiVO₄电极浸入Cu离子溶液20 s，再将电极浸入0.1 mol/L的Na₂S·9H₂O反应40 s，超纯水洗涤电极三次，得到原位生长电沉积煅烧的多孔纳米阵列BiVO₄/CuS电极；

所述的ITO导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗0.5 h，氮气下吹干；

所述的电沉积是以Ag/AgCl为参比电极，在-0.3 V进行10 s，然后在-0.1 V进行300 s；

所述的VO(acac)₂为乙酰丙酮钒，Cu离子溶液是指取0.5 ~ 1.5 mmol CuSO₄和5 ~ 7mmol Na₂S₂O₃溶于50 mL的水溶液。

3.如权利要求1所述的一种检测降钙素原电化学催化协助的自增强光电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述抗体标志物孵化物PS@Ab₂溶液的制备步骤如下：

取300 ~ 400 μL氨基化的PS，超纯水离心洗涤三次，取600 ~ 800 μL、2.5% (v/v)的戊二醛加入PS溶液振荡30 min，超纯水离心洗涤后；取0.5 ~ 1.5 mL、10 μg/mL的Ab₂，4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h，取500 uL、1%的牛血清蛋白溶液加入上述溶液振荡60 min，离心洗涤；分散在3 mL、pH 7.4的PBS缓冲溶液中，制得PS@Ab₂标记物溶液，4℃冰箱中储存以备用；

所述的PS是指聚苯乙烯微球。