[发明专利]一种高效土壤微生物总RNA提取方法

权利要求书

1.一种高效土壤微生物总RNA提取方法，其特征在于，其步骤如下：

步骤1：选择4g新鲜土样，加入2.5mL Bead Solution，再加入0.5mL SR1和1.6mLSR2，加入5mL 酚/氯仿/异戊醇，5mL 酚/氯仿/异戊醇的pH值为6.5-8.0；所述的SR1 溶液为含有SDS 以及其它用于细胞裂解的试剂；所述的SR2 溶液为沉淀溶液，去除腐殖质、细胞碎片及蛋白质非 DNA 的有机、无机成分，有机及无机成分的污染会影响到最终 RNA 的质量并抑制下游RNA 实验；

步骤2：将步骤1中的样品放置到旋涡搅拌器中，最大转速涡旋振荡20min；

步骤3：将步骤2中的样品在4℃下、2500g的离心力下离心分离15min，保留取出上层清液；

步骤4：将步骤3中的样品中加入2mL SR3，混合均匀后在4℃下孵育10min；所述的SR3溶液为沉淀溶液，沉淀蛋白质和细胞碎片；

步骤5：将步骤4中的样品在4℃、2500g的离心力下离心分离15min，保留取出上层清液；

步骤6：将步骤5中的样品加入6mL混合液后混合均匀，混合液为1:1的SR4和SR6，在4℃下孵育30min；所述的SR4为100%异戊醇，所述的SR6为盐溶液；

步骤7：将步骤6中的样品在4℃、2500g的离心力下离心分离30min，丢弃上层清液；

步骤8：将步骤7中的样品的中下层溶液倒立放置在滤纸上，干燥5min；

步骤9：将步骤8中的样品加入1mL的SR5溶液，悬起沉淀；所述的SR5为盐溶液；

步骤10：用2mL SR5润洗柱子，将步骤8中悬起RNA的SR5转移，过柱子；用过1mL SR5清洗柱子，用1mL SR6将RNA从柱子上洗脱下来；

步骤11：将步骤10中的转移洗脱下来的RNA放置到2.2mL的收集管中，加入1mL的SR4，混合均匀，在20℃下孵育至少10min；

步骤12：将步骤11中的样品在4℃、13000g的离心力下将样品离心分离15min，丢弃上层清液；

步骤13：将步骤12中的样品倒立放置在滤纸上，干燥10min；

步骤14：在步骤13中的样品加入50-100µL THE RNA Storage Solution（Ambion） ，悬起RNA沉淀；

步骤15：通过RTS DNaseTM Kit (MoBio)移除步骤14中的样品基因组DNA；

步骤16：步骤15中的样品RNAs 存储在-80℃，方便后续分析。

2.根据权利要求1所述的高效土壤微生物总RNA提取方法，其特征在于，所述的SDS 作为去垢剂，破坏细胞膜上的脂肪酸、脂质。