[发明专利]一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法

权利要求书

1.一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step.1样本基因组DNA的获取：用Qiagen DNA抽提试剂盒提取全血样本的基因组DNA；

Step.2试剂保存：将收到的试剂盒放置于-20℃的环境中保存，避免反复冻融；

Step.3 PCR扩增：取PCR Mix 5.5ul，PCR引物2ul，Taq酶1.2ul，基因组DNA 2ul，补水至15ul；PC扩增条件：预变性，95℃，10min；94℃30s，56℃90s，72℃1min，循环40次；终延伸，72℃，10min；PCR引物包括VDR，ESR1，MTHFR，MTRR，SLC19A1基因序列，引物组具有如SEQ IDNo：1-14所示的核苷酸序列；

Step.4 LDR连接：取Ligase Mix 0.5ul，探针0.5ul，连接酶1ul，PCR产物2ul，补水至5ul；预变性94℃，1min；94℃15s，50℃25s，循环40次；探针组具有如SEQ ID No：15-41所示的核苷酸序列；

Step.5毛细管电泳检测：取HIDI8.9ul，分子量内标0.1ul和连接产物2ul混合，95℃变性10min，冰浴冷却后上遗传分析仪3130XL，送样电压3KV，上样时间15sec；

Step.6结果分析：使用GeneMapper ID V3.2软件对毛细管电泳结果进行分析，统计9个SNP位点的分型结果。

2.根据权利要求1所述的一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，其特征在于：所述SLC19A1的SNP位点为rs1051266，突变位置NM_194255.2:c.80A>G(p.His27Arg；A80G)。

3.根据权利要求1所述的一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，其特征在于：所述VDR的SNP位点为rs1544410，突变位置S4((NM_001017535.1:c.1024+283G>A))；rs731236，突变位置S2(NM_001017535.1:c.1056T>C)；rs7975232，突变位置S1(NM_001017535.1:c.1025-49G>T)。

4.根据权利要求1所述的一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，其特征在于：所述ESR1的SNP位点为rs9340799，突变位置S1(NM_001122742.1:c.453-351A>G)；rs2234693，突变位置S2(NM_001122742.1:c.453-397T>C)。

5.根据权利要求1所述的一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，其特征在于：所述MTHFR的SNP位点为rs1801133，突变位置NM_005957.4:c.665C>T(p.Ala222Val；C677T)；rs1801131，突变位置NM_005957.4:c.1286A>C(p.Glu429Ala；A1298C)。

6.根据权利要求1所述的一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，其特征在于：所述MTRR的SNP位点为rs1801394，突变位置NM_002454.2:c.66A>G(p.Ile22Met；A66G)。

7.根据权利要求1所述的一种孕期叶酸代谢、钙代谢及H型高血压联合检测方法，其特征在于：所述探针组中的SEQ ID No 15、No 18、No 21、No 24、No 27、No 30、No 33、No 36、No 39为荧光标记探针。