[发明专利]一种蛋白修饰的方法

权利要求书

1.一种蛋白修饰的方法，其特征在于，包括步骤：

A、提供包含目标蛋白基因序列的载体，对所述目标蛋白基因序列中的编码氨基酸的密码子进行突变；

B、对天然氨基酸进行修饰，构建非天然氨基酸；

C、分别制备Flexizyme和tRNA^sep；

D、构建体外酯化反应体系，利用上述Flexizyme将非天然氨基酸与上述tRNA^sep进行连接，获得ThioAcX-tRNA酯化产物，其中X为任意氨基酸；

E、将上述ThioAcX-tRNA和经密码子突变的目标蛋白加入PURE EXPRESS蛋白表达系统进行反应，获得修饰后的蛋白产物。

2.根据权利要求1所述的蛋白修饰的方法，其特征在于，所述载体为pUC19载体，所述pUC19载体含有5’-UTR序列和3’-UTR序列，其中：

5’-UTR序列:

5’-GCGAATTAATACGACTCACTATAGGGCTTAAGTATAAGGAGGAAAA；

3’-UTR序列:

5’-AAACCCCTCCGTTTAGAGAGGGGTTATGCTAGTTA-3’。

3.根据权利要求1所述的蛋白修饰的方法，其特征在于，步骤B包括：对天然赖氨酸的ε位氨基进行乙酰化修饰，用3，5二硝基苯保护羧基，得到非天然赖氨酸。

4.根据权利要求1所述的蛋白修饰的方法，其特征在于，步骤C包括：分别将含有tRNA^sep和Flexizyme序列的载体经末端酶切分别线性化，作为模板，在T7 RNA polymerase作用下进行体外转录，将得到的RNA经变性PAGE纯化，分别得到tRNA^sep和Flexizyme。

5.根据权利要求1所述的蛋白修饰的方法，其特征在于，步骤A中，所述目标蛋白为人体组蛋白H3或人体组蛋白H4。

6.根据权利要求1所述的蛋白修饰的方法，其特征在于，步骤E之后，还包括步骤：

F、通过Western-免疫印迹法和高效液相-质谱联用仪对修饰后的蛋白产物进行表征。