[发明专利]从血浆分离组分Ⅰ和Ⅲ中提取静注人免疫球蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种从血浆分离组分Ⅰ和Ⅲ中提取静注人免疫球蛋白的方法，所述方法包括：(1)FⅠ+Ⅲ沉淀按照20％(wt)的浓度溶解于注射用水中，50mM辛酸钠，PH4.9条件沉淀FⅠ+Ⅲ组分中的杂质蛋白；(2)使用离子交换层析法进一步精制IgG组分；所述的使用离子交换层析法进一步精制IgG组分的步骤为：(1)Capto Q层析预处理步骤(1)制备得到的IgG溶液得IgG溶液1，(2)Capto Q XP层析处理IgG溶液1得IgG溶液2，(3)对IgG溶液2进行超滤浓缩，得IgG精制液。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，涉及一种从血浆分离组分Ⅰ和Ⅲ中提取静注人免疫球蛋白的方法。

背景技术

静注人免疫球蛋白的活性成分主要为蛋白质，其中95％以上为免疫球蛋白。免疫球蛋白主要从血浆分离组分Ⅱ中纯化提取出来，最主要的方法是通过低温乙醇法纯化制备。提取免疫球蛋白后产生的组分Ⅰ+Ⅲ(F Ⅰ+Ⅲ)沉淀，通常都被作为废物处理掉，鲜有从该组分中纯化IgG的，主要原因在于其所含成分复杂。组分Ⅰ+Ⅲ沉淀主要成分有脂蛋白、凝血因子Ⅷ(FⅧ)、IgG、IgM、纤维蛋白原、纤维结合蛋白以及其它微量的蛋白质。组分Ⅰ+Ⅲ中的各类凝血稳定因子极易在分离过程中活化，从而造成分离过程中成分不稳定，产生大量的沉淀或絮状物，这些物质难以去除。

现有报道的技术路线是使用生产提取组分Ⅱ后的Ⅰ+Ⅲ沉淀进行IgG回收工艺实验，冷浆提取组分Ⅱ后沉淀Ⅰ+Ⅲ杂蛋白杂质极多，而IgG丰度较低，需要对工艺条件包括辛酸沉淀预处理和两步离子交换层析条件进行实验和调整。

发明内容

本发明首先涉及一种两步法从血浆分离组分Ⅰ和Ⅲ中提取静注人免疫球蛋白IgG组分的方法，所述方法包括：

(1)辛酸钠沉淀F Ⅰ+Ⅲ组分，去除杂蛋白；

(2)使用离子交换层析法进一步精制IgG组分；

步骤(1)所述的辛酸钠沉淀F Ⅰ+Ⅲ组分的步骤为：

F Ⅰ+Ⅲ沉淀按照20％(wt)的浓度溶解于注射用水中，50mM辛酸钠，PH4.9条件沉淀F Ⅰ+Ⅲ组分中的杂质蛋白；

所述的沉淀F Ⅰ+Ⅲ组分中的杂质蛋白的步骤为：

(1)按设定量以常温注射用水完全搅拌溶解F Ⅰ+Ⅲ沉淀后，边搅拌边加入辛酸至设定浓度；

(2)搅拌均匀后，测定并调整pH至4.9，20℃水浴持续搅拌2h，搅拌过程中保持pH值不变，搅拌完毕后继续20℃水浴静置2h；

(3)沉淀完毕后，3500g离心，将静置上清以50p滤板过滤，最后用0.22um的滤膜过滤。

步骤(2)所述的使用离子交换层析法进一步精制IgG组分的步骤为：

(1)Capto Q层析预处理步骤(1)制备得到的IgG溶液得IgG溶液1，

(2)Capto Q XP层析处理IgG溶液1得IgG溶液2，

(3)对IgG溶液2进行超滤浓缩，得IgG精制液；

所述的Capto Q层析的具体步骤为：

(1)使用缓冲液A(200mM NaAC-HAC，pH5.4)、缓冲液B(10mM NaAC-HAC，pH5.4)分别平衡2～5个柱体积，流速150cm/h；

(2)100cm/h上样并收集滤液得IgG溶液1；

(3)清洗封存层析柱；

所述的Capto Q XP层析处理IgG溶液1的步骤为：