[发明专利]一种朝鲜淫羊藿内生菌、培养方法及其代谢产物

说明书

本发明提出了一种朝鲜淫羊藿内生菌的分离菌株Ek‑Endogenous‑S10、培养基、培养方法、分离方法及其次级代谢产物，所述一种朝鲜淫羊藿内生菌的分离菌株Ek‑Endogenous‑S10，所述分离菌株在生物学上是纯的。本发明方法分离得到的菌株可产生与宿主细胞中相同的化学成分，且具有不受时间季节限制快速、定向、易分离等优点，该真菌的结构相对简单，代谢成分简单、稳定、定向，与传统中药材相比，化学成分的提取分离效率势也大大的提高。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种朝鲜淫羊藿内生菌、培养方法及其代谢产物。

背景技术

药用植物体内普遍存在着内生菌，在药用植物的生长、道地性、产量、质量、功效成分、抗逆性等方面都产生重要的影响；另一方面，药用植物内生菌自身也能产生一些生理活性物质，在新药研发、药用植物栽培生产、菌肥开发、生防菌研发、土壤生态修复、工业化酶生产应用等方面都显示出巨大的开发潜力。

朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)为小檗科淫羊藿属多年生草本植物，是我国东北地区特有的中药资源，具有温补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效。人工栽培困难、用量有增无减的趋势使得朝鲜淫羊藿的野生资源逐年减少。因此，扩大朝鲜淫羊藿的引种栽培及寻找其代替品亟待解决。

现有黄酮类成分的获得大多从植物体中粗提取，之后通过酶分解、转化、分离等进一步提纯，不仅植物栽培过程中生长周期长，人工田间管理等成本高，后期的分离转化等成本也不容小觑。同时，由于中药材成分复杂性，无论是传统的水提法、醇提法还是现代的膜分离、新材料提取技术对中药材中有效成分提取效率不超过50％，大概在30％左右，其余均以废弃药渣处理，不仅浪费资源废物处理不当也会对环境造成污染。真菌的结构相对简单，代谢成分简单、稳定、定向，与传统中药材相比，化学成分的提取分离效率势必会大大的提高。另一方面，药用植物大多需要较长的生长周期，其道地性对环境、生长条件等要求较高，真菌则不然，只需要足够的光照、碳源、氮源即可良性生长，不受时间季节的影响，目标产物的产出率倍增。

中国专利CN10471130A和CN106995829A公开了产生淫羊藿总黄酮的方法，主要是从药材中提取总提取物，通过酶解法、转化的方法得到较纯的黄酮苷元，但该类方法产生黄酮类成分受时间季节限制且难于分离。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供一种朝鲜淫羊藿内生菌、培养方法及其代谢产物，其目的在于，提供一种朝鲜淫羊藿内生菌，该真菌的结构相对简单，代谢成分简单、稳定、定向，与传统中药材相比，化学成分的提取分离效率势也大大的提高。

本发明提供一种朝鲜淫羊藿内生菌的分离菌株Ek-Endogenous-S10，已于2019年7月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，其保藏号为：CGMCCNO.18131。

作为本发明进一步的改进，所述分离菌株在生物学上是纯的。

本发明进一步保护一种朝鲜淫羊藿内生菌Ek-Endogenous-S10的培养基，所述培养基分为液体培养基和固体培养基，所述液体培养基配方：蛋白胨10.0g，酵母提取物5.0g，NaCl 10.0g，蒸馏水1000mL，pH值为7.0，121℃高压蒸汽灭菌20min，所述固体培养基是在所述液体培养基配方基础上添加加琼脂20.0g/L，其特征在于，还加入碳源和氮源。

作为本发明进一步的改进，所述固体培养基可以替换为PDA培养基、荞麦、高粱培养基，另外加入碳源和氮源。

作为本发明进一步的改进，所述碳源为α-乳糖，所述氮源为甘氨酸。