[发明专利]一种分析不同大小HDL促胆固醇流出能力的方法及应用在审
| 申请号： | 201910627033.1 | 申请日： | 2019-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN110333359A | 公开（公告）日： | 2019-10-15 |
| 发明（设计）人： | 郭威莉 | 申请（专利权）人： | 郭威莉 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/60;G01N1/28 |
| 代理公司： | 深圳众邦专利代理有限公司 44545 | 代理人： | 王红 |
| 地址： | 450000 河南省郑*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胆固醇 培养板孔 培养液 流出 待测样品 细胞株 孵育 放射性同位素标记 高密度脂蛋白 转运蛋白基因 胆固醇转运 细胞 标记细胞 残余细胞 功能测定 膜胆固醇 闪烁液 脂蛋白 去除 接种 应用 分析 评估 | ||
1.一种分析不同大小HDL促胆固醇流出能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分离待测样品的脂蛋白，得到多组HDL，每组HDL的颗粒大小不同；
(2)将细胞株接种于培养板孔中，加入含放射性同位素标记胆固醇的培养液标记细胞，使细胞荷脂和标记，培养板孔的数量不少于步骤(1)中HDL的组数；
(3)孵育引导培养板孔内细胞株中相关膜胆固醇转运蛋白基因表达；
(4)将步骤(1)中得到的每组HDL分别加入至经步骤(3)处理后的培养板孔中，孵育；
(5)吸取培养板孔中的上清培养液，去除上清培养液中残余细胞后加入至闪烁液中，用液体闪烁计数仪检测培养液中同位素强度，计算得每组HDL促进细胞中胆固醇的流出率。
2.根据权利要求1所述的分析不同大小HDL促胆固醇流出能力的方法，其特征在于，步骤(1)中的分离的方法为快速蛋白液相色谱(Fast Protein Liquid Chromatography，FPLC)层析法。
3.根据权利要求1所述的分析不同大小HDL促胆固醇流出能力的方法，其特征在于，步骤(2)中所述细胞株包括小鼠巨噬细胞株和人体细胞株。
4.根据权利要求1所述的分析不同大小HDL促胆固醇流出能力的方法，其特征在于，步骤(3)中所述相关膜胆固醇转运蛋白包括ABCA1和非ABCA1，
步骤(3)具体为：
加入cAMP孵育引导细胞株中ABCA1表达，或不添加cAMP孵育引导细胞株中ABCA1和非ABCA1的表达，均用于介导HDL促胆固醇流出，孵育的温度为37℃，孵育的时间为16h。
5.根据权利要求1所述的分析不同大小HDL促胆固醇流出能力的方法，其特征在于，步骤(4)中孵育的温度为37℃，孵育的时间为4h。
6.根据权利要求1所述的分析不同大小HDL促胆固醇流出能力的方法，其特征在于，所述待测样品包括人血浆、人血清、分离的血清成分、脂蛋白颗粒、天然产物、生物分子和合成化合物中的一种或多种。
7.权利要求1至6中任一项所述的方法在用于分析促胆固醇流出能力对疾病影响中的应用。
8.根据权利要求7所述的用于分析促胆固醇流出能力对疾病影响中的应用，其特征在于，所述疾病包括动脉粥样硬化、糖尿病和肥胖症。
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