[发明专利]调节糖尿病患者尿液微生态结构的营养制剂的制备方法

权利要求书

1.调节糖尿病患者尿液微生态结构的营养制剂的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

1)健康个体尿液微生态数据库的建立；

2)糖尿病患者尿液微生态的采集、微生态结构的数据统计及与健康个体尿液微生态数据库的比对分析，确定导致患者尿液微生态发生紊乱的功能菌；

3)营养素摄入量与功能菌的回归模型的构建及对膳食摄入的指导分析；

4)针对性营养制剂的形成；

步骤3)的具体操作方法为：叮嘱患者在采集微生态标本前3天使用智能秤精准监测每日膳食摄入量，并用相关软件将每日摄入的食物转换为营养素摄入量，计算患者平均每日摄入的营养素，最后，将营养素摄入量作为自变量，将步骤2)中已确定的功能菌作为因变量，利用SPSS24.0逐步回归分析，根据分析结果辨别影响功能菌相对丰度的营养素，进一步判断患者需要调节摄入量的营养素种类；

步骤4)的具体操作方法为：通过步骤3)得知导致患者微生态结构紊乱的营养素种类后，利用SPSS软件和Pearson计算功能菌的相对丰度与导致功能菌相对丰度超过或低于数据库中该功能菌相对丰度的上限或下限的营养素之间的相关系数r，以确定其相关程度，如果r值所对应的p值0.05，p值是指当原假设为真时所得到的样本观察结果或更极端结果出现的概率，则进一步证实是该营养素的摄入不足导致患者尿液微生态中功能菌相对丰度的升高，接下来，在SPSS中逐步增加该营养素的摄入量，每一次以5％的增幅递增，直至r值所对应的p值≥0.05，表明患者达到这种摄入量时功能菌将不会因该种营养素的摄入量不足而发生改变，将此时营养素的量减去步骤3)中患者每日的平均摄入量，得到营养制剂中该营养素所需添加的剂量，其它营养素的补充剂量均照此方法计算，并将这些营养素配制成胶囊制剂，从而形成个体化的微生态紊乱调节制剂。

2.如权利要求1所述的调节糖尿病患者尿液微生态结构的营养制剂的制备方法，其特征在于，步骤1)中健康个体尿液微生态数据库的建立方法为：

使用导尿术采集100例健康个体未受到会阴部及尿道外口细菌污染的尿液样本，其中男、女各50例，老年与非老年各50例；

提取尿液样本的细菌DNA，采用引物341F和806R进行聚合酶链式反应，设计合成含有测序接头的双Index融合引物，以基因组DNA为模板，进行融合引物PCR，磁珠筛选目的Amplicon片段，最后，用合格的文库进行cluster制备和测序，用下机得到的数据进行相应的生物信息分析，下机数据经过数据过滤，滤除低质量的reads，剩余高质量的Clean data方可用于后期分析，通过reads之间的Overlap关系将reads拼接成Tags，在给定的相似度下将Tags聚成OTU，然后通过OTU与数据库比对，对OTU进行物种注释，利用UPARSE在97％相似度下进行聚类，得到OTU的代表序列，得到OTU代表序列后，通过RDP classifer v2.2软件将OTU代表序列与数据库Greengene 2013.5比对，进行物种注释，置信度阈值设置为0.6，采用Decontam v1.2.1过滤污染序列，过滤值设置为小于0.1，从而防止污染序列对样本信息的影响，通过上述生物学信息分析，得到健康个体尿液微生态数据库。

3.如权利要求2所述的调节糖尿病患者尿液微生态结构的营养制剂的制备方法，其特征在于，步骤2)的具体操作方法为：采用与采集健康人体尿液样本相同的方法采集糖尿病患者的尿液标本并做相同的生物信息学分析，对个体糖尿病患者的尿液微生态结构进行相关数据的统计分析，以判断其是否发生了微生态紊乱，如果患者尿液中某一细菌的相对丰度超过了健康个体尿液微生态数据库中该细菌的相对丰度的上限或下限，则判断为微生态紊乱，并进一步将患者发生紊乱的细菌定义为功能菌。

4.如权利要求2所述的调节糖尿病患者尿液微生态结构的营养制剂的制备方法，其特征在于，健康个体的入选标准为：无糖尿病或其它代谢性疾病、无基础疾病、C-反应蛋白正常、尿液分析所有参数正常、近一个月未发生过尿路感染、近一个月内未使用过抗生素和益生菌制剂。