[发明专利]重组裂解猪霍乱沙门菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种重组裂解猪霍乱沙门菌的构建方法，其特征在于，包括：向猪霍乱沙门菌的基因组中引入以下元件：

mazE表达元件：包括抗毒素基因mazE及其上游的启动子P_BAD，编码启动子P_BAD的正负调控子基因araC；

lacI表达元件：包括基因lacI及其上游的启动子P_BAD，编码启动子P_BAD的正负调控子基因araC；

mazF表达元件：包括毒素基因mazF及其上游的启动子P_lac。

2.根据权利要求1所述的重组裂解猪霍乱沙门菌的构建方法，其特征在于，通过同源重组的方法引入所述元件。

3.根据权利要求1所述的重组裂解猪霍乱沙门菌的构建方法，其特征在于，引入元件的位置处于endA、cysG、relA基因中的一个或几个。

4.根据权利要求1所述的重组裂解猪霍乱沙门菌的构建方法，其特征在于，包括：分别构建含各自表达元件的同源重组结构序列，所述同源重组结构序列在表达元件的上下游为用于敲除相应基因的同源臂；将同源重组结构序列分别连入自杀载体，转入asd基因缺失的大肠杆菌工程菌中；通过同源重组作用，将各表达元件依次转入猪霍乱沙门菌中。

5.一种重组裂解猪霍乱沙门菌，其特征在于，其基因组中引入有以下元件：

mazE表达元件：包括抗毒素基因mazE及其上游的启动子P_BAD，编码启动子P_BAD的正负调控子基因araC；

lacI表达元件：包括基因lacI及其上游的启动子P_BAD，编码启动子P_BAD的正负调控子基因araC；

mazF表达元件：包括毒素基因mazF及其上游的启动子P_lac。

6.根据权利要求5所述的重组裂解猪霍乱沙门菌，其特征在于，引入元件的位置处于endA、cysG、relA基因中的一个或几个。

7.根据权利要求5所述的重组裂解猪霍乱沙门菌，其特征在于，

mazE表达元件包括：SEQ ID NO.2所示片段2与SEQ ID NO.3所示片段3连接得到的序列；

mazF表达元件包括： SEQ ID NO.6所示的片段6。

8.根据权利要求5所述的重组裂解猪霍乱沙门菌，其特征在于，根据权利要求1~4任一项所述方法制备。

9.根据权利要求5~8任一项所述的重组裂解猪霍乱沙门菌在制备疫苗中的应用。