[发明专利]一种新型硫酸软骨素酶CslF及其应用

说明书

本发明涉及一种深海微生物来源硫酸软骨素酶CslF及其应用。所述硫酸软骨素酶CslF氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供一种硫酸软骨素酶CslF的重组表达及纯化制备方法，发酵液酶活力可达39.4 U/mL，一步纯化纯度95%，回收率为84.6%。本发明所述硫酸软骨素酶CslF具有嗜冷特性，最适反应温度为30℃，在0℃,10℃,20℃下检测活性可达到最适反应温度下的51.9%，74.3%和86.1%。所述硫酸软骨素酶CslF降解主产物为二糖和四糖，具有良好的应用潜质。

技术领域

本发明涉及一种深海微生物来源硫酸软骨素酶CslF及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

硫酸软骨素（Chondroitin sulfate），主要为动物（猪、牛、马、羊、鸡、鲨鱼等）的软骨为原料的一种高分子酸性粘多糖，其分子结构为β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通过β1→3糖苷键形成的重复二糖单位所组成的多糖链。它是一种白色或微黄色粉末，吸水性强，大量研究表明，硫酸软骨素具有降血脂、抗动脉粥样硬化和抗病毒性肝炎等活性，临床中已用于防治关节炎、肾炎、神经痛、偏头痛等。相比大分子硫酸软骨素，硫酸软骨素寡糖分子具有易于吸收，穿透性强，分布广等优势，在临床上效果更佳。

相比传统的酸解法，利用硫酸软骨素酶生物酶法降解大分子硫酸软骨素具有反应条件温和、降解产物单一、反应过程容易控制、环境友好等优势，成为硫酸软骨素寡糖制备过程中的重要方法。但是，目前市场上销售的硫酸软骨素酶价格昂贵、活力较低，品种单一，无法满足特定条件下的应用，因此急需开发新的硫酸软骨素酶。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种深海微生物来源硫酸软骨素酶CslF及其制备方法。本发明所述硫酸软骨素酶CslF产量高达39.4 U/mL，一步纯化纯度95%，回收率为84.6%。本发明所述硫酸软骨素酶CslF具有嗜冷特性，最适反应温度为30 ℃，在0 ℃，10℃，20 ℃下检测活性可达到最适反应温度下的51.9%，74.3%和86.1%。所述硫酸软骨素酶CslF降解主产物为硫酸软骨素二糖和四糖，具有良好的应用潜质。

一方面，本发明提供一种新型硫酸软骨素酶CslF，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

SEQ ID NO.1：

VPGKEILVTTQTELYYGHKVKPGDVIVMKDGVWTDVVINGNVIAVVTEVITLRAQIPGKVVLNGGVKLIGVKPNLVVQGLLGKKGVITKKDAVVIVGEVENCRLTNVGIIDYNPADGNTEYYWVLFNGVHNRVDHCYFTGKVNKQPVMQNGEENARYNKVDRCYIKDIPYVAKANGREILRIFGYGHADQPGDDGAYFTVEYNLFDHAHGEGTEIVVLKVNHNIVRYNTVIAVRGGLVGRRGKFNTFEGNFVFGKGEGYTVGIRVAGPFHRVINNYVADVTEDGLRLIAGEYYEKVLTGNFAAKKKNLPKYLQVQDCYIAQNTFVNCGENGINIGFNYKNQWPVLQMVLFPENNKFVNNLVYNCKGNAINIEVLDTTTPLDVFHFKPNFFEVNLVFGVKICNVVLPVGIIKVDPKLKLGVDGLYRLVVKVPAINNGADVDAKDDFEGVLRDAKR

另一方面，本发明还提供一种硫酸软骨素酶CslF对应的核酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：