[发明专利]一种三七药酒指纹图谱构建及其含量测定方法

权利要求书

1.一种三七药酒指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取三七药酒滤过，收集滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品适量，精密称定，加乙醇制成对照品溶液；

（3）将供试品溶液进行高效液相色谱分析，得到HPLC指纹图谱，根据与对照品的相对保留时间确定共有峰，采用LC-MS指证特征指纹峰的化学成分，利用标准品对照，建立三七药酒的HPLC指纹图谱；所述高效液相色谱分析的条件为：

色谱柱为Welch Ultimate XB-C18，4.6×250 mm，5-Micron；

质谱条件：采用电喷雾正、负离子扫描模式，扫描范围m/z 100~3000，干燥气温度350℃，干燥器流速12 L•min^-1，雾化器压力35psig，毛细管电压4000V，裂解电压175V，锥孔电压65V，碰撞能量50.00V；

流动相为乙腈(A)-水(B)，甲醇(A)-水(B)，乙腈(A)-0.05%乙酸(B)，乙腈(A)-0.05%甲酸(B)中的任意一种；

梯度洗脱：按照体积分数计，0~24min，14%A→20%A；24~40min，20%A→45%A；40~50min，45%A→55%A；50~70min，55%A→65%A；70~75min，65%A→90%A；75~90min，90%A；

流动相流速为1 mL•min^-1；

柱温为21~29℃；

检测波长为0~ (20-30) min为240nm，(20-30) ~ (30-40)min为203nm，(30-40) ~(85-95)min为240nm；

(4)根据标准品，计算待测成分的含量。

2.根据权利要求1所述的一种三七药酒指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤(3)中所述的检测波长为0-26min为240nm，26-36min为203nm，36-90min为240nm。

3.根据权利要求1所述的一种三七药酒指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤(3)中所述特征指纹峰为14个，其中峰1为原巴西苏木素B，保留时间为10.95min；峰4为阿魏酸，保留时间为21.79min；峰6为人参皂苷rg1，保留时间为34.85min；峰7为淫羊藿苷，保留时间为37.60min；峰8为补骨脂素，保留时间为41.52min；峰9为异补骨脂素，保留时间为42.46min；峰10为新补骨脂异黄酮，保留时间为50.95min；峰11为补骨脂甲素，保留时间为52.62min；峰12为补骨脂定，保留时间为57.32min；峰13为藁本内酯，保留时间为59.17min；峰14为补骨脂乙素，保留时间为62.72min；峰16为补骨脂二氢黄酮甲醚，保留时间为65.08min；峰18为补骨脂酚，保留时间为78.82min；峰19为11-羰基-β-乙酰乳香酸，保留时间为87.64min。