[发明专利]猪源杂合抗菌肽PP-1及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种猪源杂合抗菌肽PP‑1及其制备方法和应用，抗菌肽的序列如序列表SEQ ID No.1所示。本发明以PR‑39为目标，截取其片段与猪源骨髓抗菌肽PMAP‑23或PMAP‑36的片段杂合而获得氨基酸长度19至22的3条抗菌肽序列；然后使用多肽合成仪，进行固相合成法合成多肽；进行纯化，并利用电喷雾质谱法进行鉴定；最后，通过最小抑菌浓度和溶血试验测定衍生抗菌肽的抑菌活性和细胞毒性，筛选具有较理想活性的多肽。本发明的抗菌肽PP‑1安全性较好，具有广谱抗菌活性、低毒性和低溶血性；该的抗菌肽由19个氨基酸组成，肽链较短，制备方法简单且技术成熟，合成成本低，适合应用于生产。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种猪源杂合抗菌肽PP-1及其制备方法和应用。

背景技术

传统抗生素提高了动物的生产性能，降低了疾病发生率，但同时也导致药物残留、耐药性菌株、环境污染等问题的产生。特别是近些年来滥用抗生素以及耐药性问题呈现日益加剧的趋势，由此可见研发高效且安全的新型饲料对传统抗生素进行替代具有重要意义。抗菌肽是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分, 不仅具有抑制、杀灭多种细菌、真菌、病毒、寄生虫的生物学功能，而且可以提高动物机体免疫能力，不存在残留、无任何副作用。因此，抗菌肽替代抗生素已成为近年来的研究热点。

猪源抗菌肽种类较多，其中PR-39研究较为广泛，是一种富含脯氨酸-精氨酸的由39个氨基酸残基组成的线性内源性抗菌肽。但是，其主要对革兰氏阴性菌具有抗菌作用，对部分革兰氏阳性菌，比如金黄色葡萄球菌和铜绿加单孢菌等，没有抑制作用。因此如何拓宽PR-39的抗菌谱具有重要的意义。

发明内容

基于以上不足之处，本发明的目的在于提供一种猪源杂合抗菌肽PP-1，其序列如序列表SEQ ID No.1所示，该多肽由猪源抗菌肽PR-39与猪源骨髓抗菌肽 PMAP-23杂合，安全性较好，具有广谱抗菌活性、低毒性和低溶血性。

本发明的另外一个目的在于提供一种猪源杂合抗菌肽PP-1的制备方法，该制备方法简单且技术成熟，合成成本低，适合应用于生产，方法步骤如下：

(1)根据猪源抗菌肽PR-39的氨基酸组成特点，截取其片段与猪源骨髓抗菌肽PMAP-23或PMAP-36的片段杂合而获得氨基酸长度19至22的3条杂合抗菌PP-1、PP-2和PP-3，其序列分别如序列表SEQ ID No.1-3所示；

(2)采用固相化学合成法，通过多肽合成仪合成多肽；

(3)将合成的多肽使用反相高效液相色谱进行纯化，并利用电喷射质谱法对合成的多肽进行鉴定，完成多肽的制备；

(4)采用美国临床实验室标准化研究所推荐的测定最小抑菌浓度的方法，发现杂合抗菌PP-1的最小抑菌浓度平均值为3.56μM，且无溶血毒性，综合治疗指数达到144，从而选取猪源杂合抗菌肽PP-1。

本发明的另一目的在于提供如上所述的猪源杂合抗菌肽PP-1的在制备治疗革兰氏阳性菌或/和革兰氏阴性菌感染性疾病药物中的应用。

本发明的优点及有益效果：该多肽由猪源抗菌肽PR-39与猪源骨髓抗菌肽 PMAP-23杂合，安全性较好，具有广谱抗菌活性、低毒性和低溶血性；该多肽由19个氨基酸组成，肽链较短，制备方法简单且技术成熟，合成成本低，适合应用于生产。

附图说明

图1为抗菌肽PP-1的质谱图。

图2为抗菌肽PP-2的质谱图。

图3为抗菌肽PP-3的质谱图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：猪源杂合抗菌肽的设计