[发明专利]一种检测血液中维生素K2含量的方法

说明书

本发明提供了一种检测血液中维生素K2含量的方法，该方法包括：利用高效液相串联质谱仪检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，该标准溶液含浓度已知的维生素K2和内标物；以标准溶液中维生素K2与内标物的浓度比值为一二维坐标，以该标准溶液的色谱图中，两者峰面积比值为另一二维坐标，拟合得到标准曲线方程；处理待检测血液得到血液样品，并加入浓度已知的内标物，经样品前处理以得到待测样品；在相同检测条件下检测待测样品得到色谱图；将该色谱图中维生素K2和内标物的峰面积比值代入到标准曲线方程中，并根据所添加内标物的浓度，计算出待检测血液中维生素K2的含量。本发明能够准确检测血液中的维生素K2含量。

技术领域

本发明涉及化学技术领域，特别涉及一种检测血液中维生素K2含量的方法。

背景技术

维生素K2为脂溶性维生素，其作为谷氨酸-γ-羧化酶的辅酶参与机体的正常凝血过程。临床上，维生素K2可广泛用于治疗新生儿、婴儿及孕妇由于维生素K缺乏造成的出血症，治疗和预防骨质疏松症。维生素K2生成骨蛋白质，再与钙共同生成骨质，增加骨密度，防止骨折。同时，饮食中加入适当的维生素K2可以有效地降低冠状动脉钙化。此外，近几年研究发现，维生素K2对多种恶性肿瘤细胞有生长抑制作用，并可诱导肝细胞癌、卵巢癌等多种实体瘤和白血病骨髓增生异常综合征的细胞凋亡，具有明显的抗肿瘤作用，且与多种抗肿瘤药有协同作用。

目前，可利用HPLC(High Performance Liquid Chromatography，高效液相色谱法)，对维生素K2原料药、维生素K2为有效成分的制剂、患者服用维生素K2相关药物后的血液样本等类型样本，进行维生素K2含量的检测。

但这类检测对灵敏度要求较低，通常不能检测血液中的维生素K2含量，或检测准确率较低。

发明内容

本发明提供了一种检测血液中维生素K2含量的方法，能够准确检测血液中的维生素K2含量。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了一种检测血液中维生素K2含量的方法，包括：

利用高效液相串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测N个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的维生素K2和浓度已知的内标物，不同标准溶液中维生素K2的浓度不同，且N≥3；

以标准溶液中，维生素K2的浓度与内标物的浓度的比值为一二维坐标，以及以该标准溶液的色谱图中，维生素K2的峰面积和内标物的峰面积的比值为另一二维坐标，拟合得到标准曲线方程；

处理待检测血液得到血液样品；

将一定量的含有浓度已知的内标物的内标工作液，添加到所述血液样品中，并进行样品前处理以得到待测样品；

利用高效液相串联质谱仪，在相同检测条件下，检测所述待测样品，得到所述待测样品的色谱图；

将所述待测样品的色谱图中，维生素K2的峰面积和内标物的峰面积的比值，代入到所述标准曲线方程中，并根据所添加的内标物的浓度，计算出所述待检测血液中维生素K2的含量；

其中，所述标准曲线方程为：y＝k×x+b，其中，y表征峰面积比值，x表征浓度比值，k和b均表征系数。

优选地，所述检测条件包括：液相条件和串联质谱条件；

其中，所述液相条件包括：色谱柱的长度为50mm、内径为3.0mm、填料粒径为2.7μm，流动相为含体积比为0.05％-0.25％甲酸的纯水和含体积比为0.05％-0.25％甲酸的甲醇，分析时间为7.5min，柱温为27℃-33℃，进样量为10μL-30μL，流速为0.55mL/min-0.65mL/min；