[发明专利]免疫原、分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞及制备方法、单克隆抗体及应用

说明书

本发明涉及一种免疫原、分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞及制备方法、单克隆抗体及应用。该免疫原包括第一多肽及与所述第一多肽连接的第二多肽，所述第一多肽包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的多肽，所述第二多肽包括氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽。由上述免疫原制备得到的抗心肌肌钙蛋白I的单克隆抗体的特异性高，灵敏度好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种免疫原、分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞及制备方法、单克隆抗体及应用。

背景技术

心肌肌钙蛋白(cardiac troponin，cTn)由三种不同亚基组成：心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTn I)和肌钙蛋白C(TnC)。其中，心肌肌钙蛋白I(cTn I)的组织特异性高，是心肌损伤的高敏感性标志物。

在临床上检测心肌肌钙蛋白I的含量的方法主要有免疫层析法、ELISA法、化学发光法。这些检测方法主要依赖于抗心肌肌钙蛋白I抗体与检测样本中的心肌肌钙蛋白I的特异性结合能力。因此，抗心肌肌钙蛋白I抗体与心肌肌钙蛋白I的结合的特异性和灵敏度对于检测心肌肌钙蛋白I的含量十分重要。

但是，目前市场上特异性较好、灵敏度较高的抗心肌肌钙蛋白I抗体还较少，不能满足市场的需求。

发明内容

基于此，有必要提供一种免疫原，由该免疫原制备得到的抗心肌肌钙蛋白I的单克隆抗体的特异性较好、灵敏度较高。

此外，还提供一种分泌特异性较好、灵敏度较高的抗心肌肌钙蛋白I的单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用。

一种免疫原，包括第一多肽及与所述第一多肽连接的第二多肽，所述第一多肽包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，所述第二多肽包括氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。

而上述免疫原包括第一多肽及与所述第一多肽连接的第二多肽。第一多肽针对人心肌肌钙蛋白I氨基酸序列的104～120位的17个氨基酸设计，第二多肽针对人心肌肌钙蛋白I氨基酸序列的196～210位的15个氨基酸。采用上述免疫原制备的单克隆抗体能够特异性地与人心肌肌钙蛋白I结合，针对的抗原表位明确，获得特异性单抗的筛选过程相对简单，且该单克隆抗体与心肌肌钙蛋白I的亲和力强、特异性和灵敏度较高。

在其中一个实施例中，所述第一多肽包括多个依次连接的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示的多肽；及/或

所述第二多肽包括多个依次连接的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽。

在其中一个实施例中，所述第一多肽与所述第二多肽由载体蛋白偶联；

在其中一个实施例中，所述载体蛋白选自血蓝蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵白蛋白、兔血清白蛋白及纤维蛋白原中的一种。

一种分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法，包括如下步骤：

用上述免疫原免疫动物，得到免疫后的动物的脾细胞；

将所述脾细胞与骨髓瘤细胞融合，然后筛选得到阳性融合细胞；及

对所述阳性融合细胞进行亚克隆，得到所述分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞。

一种分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞，由上述的分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法制得。

一种抗心肌肌钙蛋白I的单克隆抗体，由上述分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞分泌。

上述免疫原、上述分泌抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的杂交瘤细胞、或上述抗心肌肌钙蛋白I的单克隆抗体在制备心肌肌钙蛋白I检测试剂、制备心肌肌钙蛋白I检测试纸或制备心肌肌钙蛋白I检测试剂盒中的应用。