[发明专利]一种同时检测血液中多种脂溶性维生素含量的方法

权利要求书

1.一种同时检测血液中多种脂溶性维生素含量的方法，其特征在于，包括：

利用高效液相串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测N个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的脂溶性维生素及其内标物，不同标准溶液中同一脂溶性维生素的浓度不同，且N≥3；

以标准溶液中，一脂溶性维生素的浓度与其内标物的浓度的比值为一二维坐标，以及以该标准溶液的色谱图中，该脂溶性维生素的峰面积与其内标物的峰面积的比值为另一二维坐标，拟合得到该脂溶性维生素的标准曲线方程，从而得到各种脂溶性维生素的标准曲线方程；

处理待检测血液得到血液样品；

用移液枪移取一定量的含有浓度已知的内标物的混合内标工作液，置于离心管中，再加入50μL-300μL所述血液样品，再加入一定量的乙醇，在1500rpm-2500rpm的转速下涡旋混合2min-5min；涡旋混合后在离心管中加入一定量的正己烷，在1500rpm-2500rpm的转速下涡旋混合3min-10min，再在10000rpm-15000rpm的转速下高速离心4min-6min；移取一定量离心后的上清液至离心管中，并转移至氮气吹干装置上以将上清液吹干；移取一定量的乙腈至上清液吹干的离心管中，在1500rpm-2500rpm的转速下涡旋混合1min-3min，再移取一定量的纯水至离心管中，在1500rpm-2500rpm的转速下涡旋混合1min-3min；再在10000rpm-15000rpm的转速下高速离心4min-6min，得到待测样品；

利用高效液相串联质谱仪，在相同检测条件下，检测所述待测样品，得到所述待测样品的色谱图；

将所述待测样品的色谱图中，一脂溶性维生素的峰面积与其内标物的峰面积的比值，代入到该脂溶性维生素的标准曲线方程中，并根据所添加的其内标物的浓度，计算出所述待检测血液中该脂溶性维生素的含量，从而得到所述待检测血液中各种脂溶性维生素的含量；

其中，第i种脂溶性维生素的标准曲线方程为：y_i=k_i×x_i+b_i，其中，y_i表征峰面积比值，x_i表征浓度比值，k_i和b_i均表征系数；

所述检测条件包括：液相条件和串联质谱条件；

其中，所述液相条件包括：色谱柱的长度为50mm、内径为3.0mm、填料粒径为2.7μm 的Poroshell 120 EC-C18色谱柱，流动相为含体积比为0.05%-0.25%甲酸的甲醇水溶液和含体积比为0.05%-0.25%甲酸的甲醇乙腈溶液，甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为85：15，甲醇乙腈溶液中甲醇与乙腈的体积比为3：1，甲醇水溶液和甲醇乙腈溶液的百分用量比，在3.1min-6.5min的洗脱时间范围内为0：100，在其他洗脱时间范围内为100：0；分析时间为8.0min，柱温为25℃-33℃，进样量为10μL-30μL，流速为0.6 mL/min；

其中，所述串联质谱条件包括：采用大气压化学电离源APCI，正离子扫描模式，选择反应监测模式，温度为300℃，气帘气压力为20psi，碰撞气流速为5μL/min，离子喷雾电压为5500V，雾化气压力为25psi；

所述脂溶性维生素包括：维生素A、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3、维生素E、维生素K1、维生素K2。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述液相条件包括：柱温为30℃。