[发明专利]一种基于AuNPs@ZIF-8的适配体荧光传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种用于miRNA-10b的定量检测的基于AuNPs@ZIF-8的适配体荧光传感器的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)制备AuNPs@ZIF-8材料；

(2)将DNA Lock1溶液和DNA DNAzyme溶液混合，加热后冷却，得到锁定的DNAzyme溶液；

(3)将锁定的DNAzyme溶液和DNA S1溶液加入到AuNPs@ZIF-8溶液中，再加入吐温-20溶液，室温培育10～15h；

(4)分四次向步骤(3)中加入氯化钠水溶液，每次加入的时间间隔为40～45min；加入完成后继续培育22～26h，所得产物经离心、洗涤后，分散在缓冲溶液中，即可得到所述基于AuNPs@ZIF-8的适配体荧光传感器DNAzyme-AuNPs@ZIF-8荧光传感器；

DNA S1与锁定的DNAzyme的摩尔比为20:1；

所述DNA Lock1、DNA DNAzyme、DNA S1的序列分别为：

DNA Lock1：5'-TTGAAG CAC AAA TTC GGT TCT ACA GGG TA-3’；

DNA DNAzyme：

5'-SH-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTATTCTTCCGACCGGTCGAAAATAGTGGCCCGAATTTGTGCTTCAA-3’；

DNA S1：5’-SH-TTTTTTTTTTTTTTGGGCCACTAT rAGGAAT-FAM-3’。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述AuNPs@ZIF-8材料的制备方法为：向ZIF-8的甲醇溶液中，逐滴加入氯金酸水溶液，搅拌反应5～8h；然后迅速加入新配置的硼氢化钠甲醇溶液，继续反应1～1.5h，所得产物经清洗、离心、干燥，即可得到所述AuNPs@ZIF-8材料。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述ZIF-8的甲醇溶液的浓度为1.5～2.5mg/mL；所述氯金酸水溶液的重量浓度为0.8～1.5％；所述硼氢化钠甲醇溶液的浓度为6.0～8.0mg/mL，ZIF-8的甲醇溶液、氯金酸水溶液、硼氢化钠甲醇溶液的体积之比为8～12：0.2～0.4：1。

4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，所述DNA Lock1溶液、DNA DNAzyme溶液和DNA S1溶液的浓度均为100μM，AuNPs@ZIF-8溶液的浓度为1mg/mL。

5.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述DNA Lock1溶液与DNA DNAzyme溶液的体积之比为1:3；所述加热冷却指的是：加热到70～80℃保持3～5min后，以0.5～1.5℃/min的速度缓慢降温到室温。

6.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，锁定的DNAzyme溶液、DNA S1溶液与AuNPs@ZIF-8溶液的体积之比为1:5:194；所述吐温-20在体系中的终浓度为0.05％。

7.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述氯化钠水溶液的浓度为0.1M；每次加入的氯化钠水溶液与DNA S1溶液的体积之比为2:1。

8.根据权利要求1-7任意一项所述的制备方法制备得到的基于AuNPs@ZIF-8的适配体荧光传感器在检测miRNA中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述miRNA的检测方法包括以下步骤：

将所述基于AuNPs@ZIF-8的适配体荧光传感器分散到pH5.5的Tris-HCl缓冲溶液，分别加入一系列不同浓度的miRNA-10b溶液，培养后，检测各体系对应的荧光信号，构建荧光强度和miRNA-10b溶液的浓度的线性关系，进而实现对miRNA-10b的定量检测。