[发明专利]用于腺病毒检测与分型的引物和探针、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及分子学生物检测领域，更具体的，涉及腺病毒检测领域。本发明提供了一种引物和探针，其可特异性地检测腺病毒并对腺病毒3型和7型进行分型，与此同时，本发明还提供了所述引物和探针用于检测腺病毒的用途，包含所述引物和探针的试剂盒以及用于检测腺病毒的方法。

技术领域

本发明属于分子学生物检测领域，更具体的，属于人腺病毒检测领域。

背景技术

腺病毒最早是1952年-1953年，在美国密苏里州，由Rowe等在人扁桃腺组织分离得到。人腺病毒（Human Adenovirus，HAdV）属于腺病毒科（Adenoviridae）的哺乳动物腺病毒属（Mastadenovirus），为DNA病毒，无包膜，病毒衣壳呈二十面体对称结构，直径约70~90nm，其病毒粒子在感染的细胞核内常呈晶格状排列，每个病毒颗粒包含一个双链DNA，由252个直径8~10nm的壳粒组成，壳粒排列在三角形的面上，每边6个，其中240个为六邻体（Hexon），另12个为五邻体。腺病毒六邻体中99%以上的变异主要集中在于7个高变区HVRs中，所以腺病毒型特异性和种特异性定位于这些区域，测定人腺病毒六邻体蛋白高变区序列则有助于确定分离到的毒株型别。

根据HAdV基因组的核苷酸序列特点、Hexon蛋白和Fiber蛋白特点及免疫原性，将HAdV分为７组（HAdV A-G），到目前为止已经鉴定的有67个不同的型别。有三分之一的腺病毒与人类疾病相关，主要感染人类呼吸道和消化道，其中1、2、3、4、6、7、8、11、14、21、37、40和41型腺病毒等容易引起急性呼吸道疾病、流行性眼角膜结膜炎（红眼病）、急性咽结膜炎、婴幼儿致死性肺炎、胃肠炎等。在所有儿童的呼吸道疾病中大概有5%-15%的感染是由腺病毒引起的引起。

在不同国家、不同地区流行的腺病毒都会有所不同，有些型别可能在各个国家或各个大陆之间交替占据主导地位。

存在对更适合我国流行的腺病毒检测的产品的需求。

荧光定量PCR技术目前已用于腺病毒的检测中。例如，中国专利公开CN102140549A公开了一种腺病毒实时荧光定量PCR试剂盒，其通过一对引物和探针能够检测出腺病毒，但其并未对灵敏度和特异性进行研究。中国专利公开CN103160619 A公开了一种腺病毒多重荧光定量PCR试剂盒，其可以检测出腺病毒，并且还可以对B和E亚群进行分类，但其并未对特异性进行探讨，并且也不适合我国流行的腺病毒的检测。

因此，现有技术需要能够适合我国流行的腺病毒的检测，并且灵敏度高、特异性好的基于实时荧光定量PCR的产品。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了基于实时荧光定量PCR技术的腺病毒检测产品。

第一方面，本发明提供了一种用于检测腺病毒并对腺病毒3型和7型进行分型的引物和探针，所述引物和探针包括：

如SEQ ID NO:4所示的腺病毒3、7型共用上游扩增引物和如SEQ ID NO:5所示的腺病毒3、7型共用下游扩增引物；

如SEQ ID NO:6所示的腺病毒3型的探针和如SEQ ID NO:7所示的腺病毒7型的探针。

如前所述，不同国家、不同地区流行的腺病毒都会有所不同。本发明人通过研读相关报道后发现腺病毒血清型1-7占婴儿和儿童腺病毒感染的80%以上。美国从人群中（儿童和成年人）分离到的腺病毒HAdV-3占34.6%、HAdV-2占24.3%、HAdV-1占17.7%、HAdV-5占5.3%、HAdV-4占4.8%、HAdV-7占3%；加拿大流行的血清型为HAdV-3占46%、HAdV-2占26%、HAdV-1占18%；英国最常见的血清型依次为HAdV-2（占18.6%）、HAdV-3（占14.9%）、HAdV-1（占12.1%）。