[发明专利]一种脐带MSCs改性细菌纤维素复合支架材料及其制备方法

权利要求书

1.一种脐带MSCs改性细菌纤维素复合支架材料，其特征在于，包括改性细菌纤维素复合膜和种植于改性细菌纤维素复合膜上的脐带MSCs。

2.一种权利要求1所述的脐带MSCs改性细菌纤维素复合支架材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，

S1，脐带MSCs的分离培养，以新生儿脐带华通氏胶经MSCs培养基培养得到P3代脐带MSCs；

S2，以Acetobacter xylinum M12为出发菌株，在细菌纤维素生物合成的培养基中添加羧甲基纤维素、海藻酸钠和聚乙烯醇，经静置发酵后提取细菌纤维素复合膜，然后测定细菌纤维素复合膜的产量、湿膜含水量；然后经冷冻干燥后测定复合膜的物理性能；

S3，取细菌纤维素膜，湿热灭菌，PBS浸泡24h，Mesencult^TM培养液浸泡24h，将P3代脐带MSCs以1.0x10⁶cells/cm²的密度种植于改性细菌纤维素复合膜上，温度在37℃，体积分数为0.05的C0₂孵箱中，应用Mesencult^TM培养液培养，每3d换液，得到脐带MSCs改性细菌纤维素复合支架材料。

3.根据权利要求2所述的一种脐带MSCs改性细菌纤维素复合支架材料的制备方法，其特征在于，所述S1中，将将新生儿脐带组织块剪成1×1×1mm³大小，平铺于培养瓶底，取出采集24h内，病毒检测和细菌检测合格的新鲜脐带至培养平皿中，加入适量的生理盐水，洗涤脐带至表面干净无血渍，将脐带剪成2～3cm的小段，沿静脉血管剪开，小心剥离静脉血管壁和动脉血管后将华氏胶剥离，剥离的华氏胶用组织剪剪碎至1mm大小，按100g/L接种于含10％胎牛血清的DMEM-F12培养液的T75培养瓶中，置CO₂培养箱中培养，每隔2～3d换液，倒置显微镜观察爬出的细胞形态，待细胞90％融合后，传代P1。

4.根据权利要求3所述的一种脐带MSCs改性细菌纤维素复合支架材料的制备方法，其特征在于，传代培养细胞融合90％时，在超净工作台中除去瓶内的培养液，用20ml生理盐水清洗细胞生长面2遍，加入3ml0.125％的消化酶37℃消化，在倒置显微镜下观察被消化的细胞，待细胞变圆，不连接成片后加入3ml完全培养基中和，并加20ml生理盐水稀释后，吹打制成细胞悬液，将细胞悬液吸出置离心管中，2000r/min离心5min，离心半径10cm，细胞计数后以1.0x10⁴细胞/cm²接种到培养基为Mesencult^TM的T75培养瓶中，2～4h即可见大多数细胞贴壁，3～4d后即可融合90％，需要再次进行传代，传代方法同上，直至传代至P3。

5.根据权利要求2所述的一种脐带MSCs改性细菌纤维素复合支架材料的制备方法，其特征在于，在细菌纤维素生物合成的培养基中分别添加羧甲基纤维素0.5g/L、海藻酸钠1.0g/L和聚乙烯醇1.5g/L。