[发明专利]一种荧光探针DCCO及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种荧光探针DCCO及其制备方法和应用。所述的荧光探针是7‑(二乙基氨基)‑3‑(E)‑3‑(9‑乙基‑9H‑咔唑‑3‑基)丙烯酰基)‑2H‑吡喃‑2‑酮。其制备方法：将3‑乙酰基‑7‑(二乙基氨基)‑2H‑吡喃‑2‑酮和9‑乙基‑9H‑咔唑‑3‑甲醛按等摩尔比溶解于乙醇/乙腈(1/1，V/V)混合溶液中，滴入哌啶，加热回流，溶液由橘黄色变为红色；减压除去溶剂，梯度洗脱法进行柱层析分离，得到荧光探针的粗产物；用乙醚溶解，过滤，干燥，即得到纯产物。该荧光探针对ClO^‑的检测是比率型的，并且显示了高的灵敏性、以及良好的选择性和稳定性，并且具有检测过程简便、快速，检测结果准确等优点。该荧光探针DCCO可在生物样品ClO^‑检测中应用。

技术领域

本发明涉及有机小分子荧光探针，具体属于一种荧光探针DCCO及其制备方法，以及该探针应用于生物样品中ClO^-的检测。

背景技术

100多年来，ClO^-作为一种有效的可抗多种微生物的药物，被用作临床上的通用消毒剂。在动物和人体中，ClO^-也被认为是免疫应答过程中的关键杀菌剂，与中性粒细胞吞噬细菌的消化过程相对应。然而，炎症状态下，产生的过量HClO可能引发或加剧多种疾病，包括阿尔茨海默病，心血管疾病，动脉粥样硬化，炎症性肠病，心肌梗塞，器官移植排斥，甚至癌症。因此，迫切需要开发一种用于检测生物体中ClO^-的快速有效的工具。

目前已经存在的检测次氯酸或次氯酸盐的方法有色谱法，化学发光法，电分析法等。然而，这些方法灵敏度低，操作复杂，更重要的是，不能应用于体内HClO/ClO^-的检测。而荧光探针作为最有力的检测分析物的工具之一，因为它们具有高灵敏度，操作简单不需要借助复杂仪器就可实现对分析物的检测，并且还具有易于可视化细胞内动力学和高分辨率定位感兴趣的生物分子的优点，比率型荧光探针具有两个相互独立的荧光信号，可以更好地避免背景干扰。通过激光共聚焦显微镜进行荧光成像，可实现生物体内次氯酸盐的检测。因此，这就迫切需要合成具有简单、灵敏度高、选择性好、检出限低、光稳定性好的荧光探针用于检测生物样品的ClO^-。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种荧光探针DCCO。目的之二是提供该探针DCCO的制备方法，该制备工艺简单，成本低廉。目的之三是提供该探针的用途，即应用于生物样品中ClO^-的检测。该探针应具有快速响应、灵敏度高、选择性、和光稳定性好，能够有效减小生物样品自身荧光的干扰等优点。

本发明提供的一种荧光探针DCCO，其是7-(二乙基氨基)-3-(E)-3-(9-乙基-9H-咔唑-3-基)丙烯酰基)-2H-吡喃-2-酮，结构式为：

本发明提供的一种的荧光探针DCCO的制备方法，包括如下步骤：

(1)将3-乙酰基-7-(二乙基氨基)-2H-吡喃-2-酮和9-乙基-9H-咔唑-3-甲醛按等摩尔比溶解于乙醇/乙腈(1/1，V/V)混合溶液中，滴入哌啶，加热回流30小时，溶液由橘黄色变为红色，TLC跟踪反应(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝1:3)；

(2)反应结束后，减压除去溶剂，梯度洗脱法进行柱层析分离，先用乙酸乙酯/石油醚(1/3，V/V)洗脱，再用乙酸乙酯/石油醚(1/2，V/V)洗脱，得到荧光探针的粗产物；

(3)粗产物用乙醚溶解，过滤，干燥，即得到橘黄色絮状的纯产物DCCO。

其合成路线如下：

本发明提供的一种定量荧光检测ClO^-的方法，其步骤为：

(1)用DMSO配制1mM的荧光探针DCCO储备液；