[发明专利]一种紫色红曲霉酯合成酶LIP05、编码基因及其应用

权利要求书

1.一种紫色红曲霉酯合成酶LIP05，其特征在于，所述紫色红曲霉酯合成酶LIP05的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种权利要求1所述紫色红曲霉酯合成酶LIP05的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.用于扩增权利要求2所述编码基因的引物对，其特征在于，所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

4.一种含有权利要求2所述编码基因的重组载体。

5.根据权利要求4所述重组载体，其特征在于，所述重组载体的基础质粒为pCold-TF。

6.一种重组细胞，其特征在于，包含权利要求2所述编码基因或权利要求4或5所述重组载体。

7.权利要求1所述紫色红曲霉酯合成酶LIP05、权利要求2所述编码基因、权利要求3所述引物对、权利要求4或5所述重组载体或权利要求6所述重组细胞在合成己酸乙酯和辛酸乙酯中的应用。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述合成己酸乙酯和辛酸乙酯的方法包括以下步骤：

1)以权利要求2所述编码基因为模板，用权利要求3所述引物对进行PCR扩增，得到扩增产物；

2)将所述扩增产物插入质粒表达载体中，得到重组载体；

3)将所述重组载体转入原核表达系统中，得到重组细胞；

4)将所述重组细胞进行酯合成酶LIP05的诱导表达，收集菌体，破碎，收集上清液，得到含有紫色红曲霉酯合成酶LIP05的粗酶液；

5)将所述含有紫色红曲霉酯合成酶LIP05的粗酶液与底物混合，催化反应，萃取，得到己酸乙酯和辛酸乙酯。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述合成己酸乙酯和辛酸乙酯的反应体系为每10mL反应体系中包含1mL所述粗酶液和9mL原料液；所述原料液以pH值3.5～4.5柠檬酸缓冲液为基础缓冲液，还包含0.5～1.5mol/L乙醇、8～12mmol/L己酸和8～12mmol/L辛酸。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述合成己酸乙酯和辛酸乙酯的反应条件为在29～31℃、转速140～160rpm的条件下振荡培养11～13h。