[发明专利]基于SSR标记及qPCR检测枇杷非整倍体分子核型的方法

权利要求书

1.一种基于SSR标记及qPCR检测枇杷非整倍体分子核型的方法，具体包括如下步骤：

(1)采取所检测材料及其对照材料的嫩叶；

(2)提取基因组DNA，检测DNA质量；

(3)使用筛选获得的SSR引物对(2)中基因组DNA进行qPCR检测，数据处理确认所检测枇杷非整倍体分子核型；其所用来鉴定枇杷非整倍体分子核型的17对引物是通过枇杷SSR高密度连锁图谱筛选而来，具体见下表1：

表1 17对引物

；所述数据处理包括以下步骤：

①通过qPCR的扩增曲线在PCR扩增的指数增长期选取底部、中部、顶部3个CT值；

②在3个CT值分别查看每对SSR引物的PCR产物的量ΔRn₁、ΔRn₂、ΔRn₃，并求出每对SSR引物的ΔRn平均值(ΔRn₁+ΔRn₂+ΔRn₃)/3；

③各连锁群对应的SSR引物互相作为对照，以其中一对SSR引物的ΔRn平均值对全部SSR引物的ΔRn平均值进行均一化；

④全部SSR引物在对照材料中的ΔRn平均值作为分母进行再次均一化并作为对照，在所检测材料中的ΔRn除以对照的ΔRn值进行均一化，并与对照比较，依据比较后的差异结合染色体制片结果判断染色体数目并定位染色体异常所在的连锁群。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述所检测材料的ΔRn比值变化情况与其分子核型理论对应关系如下：1为2n,3n,4n核型；0.5为2n-1核型；1.5为2n+1核型；0.67为3n-1核型；1.33为3n+1核型；0.75为4n-1核型；1.25为4n+1核型。