[发明专利]一种鸭源大肠杆菌益生菌菌株及其筛选制备方法与用途

说明书

本发明公开的一种鸭源大肠杆菌益生菌菌株，保藏号为GDMCC NO：60693。本发明还提供了该菌株的筛选制备方法，包括(1)鸭源大肠杆菌的分离：(2)药敏感性的筛选；(3)耐酸性筛选；(4)胆盐耐受筛选；(5)胆汁耐受筛选；(6)安全性筛选；(7)改造筛选出来的菌株基因组。本发明还公开了该菌株的用途，能够应用于制备预防和控制鸭源大肠杆菌感染、沙门氏菌感染的药物。本发明的优点在于，能够提高鸭机体抗体水平，综合评估其安全性高，是在预防和控制鸭重要细菌性肠道感染疾病领域中的一种新药，为该领域的发展提出了新的研究方向，也为该领域的发展奠定了十分积极、价值极高的基础。

技术领域

本发明属于菌株筛选重组的技术领域，具体为一种鸭源大肠杆菌益生菌菌株及其筛选制备方法与用途。

背景技术

禽病原性大肠杆菌血清型众多，抗原结构复杂，选择优势血清型菌株制成疫苗控制禽源大肠杆菌病，常因大肠杆菌血清型众多，不能得到推广使用，而且菌苗还可能由于内毒素引起不良反应。国内外目前仍未出现血清交叉保护效率性好，保护效率高，广谱的疫苗产品出现。在生产条件较好的厂区，会结合综合生产管理进行细菌性病原菌感染的防控，减少大肠杆菌病发生和致病性大肠杆菌的带菌污染，但国内家禽生产中大肠杆菌病的防治仍主要靠抗生素的大量使用，这种状态导致一系列严重后果，如大量耐药菌株的出现等。沙门氏菌污染对生产效益，以及食品安全同样有很大的影响。随着人民生活质量提高，国际家禽生产要求提高，地球环境压力的大前提下，减抗无抗(抗生素)生产要求越来越高，越来越紧迫，对家禽如鸭生产中，致病性大肠杆菌、沙门氏菌等极大影响生产的细菌性病原菌的感染迫切需要寻求抗生素防控之外的解决措施。

大肠杆菌作为人及动物肠道正常菌群的重要成员，近年来在疫苗载体的研究中日益受到重视，尤其是在研制基因工程黏膜疫苗方面显现出独特的优越性，如对肠道组织和细胞的生态小境亲嗜性，存活和增殖能力强，适于口服免疫接种，特别是超前口服免疫，能将展呈外源抗原表位和粘附素的载体菌有效地定植在机体内肠道黏膜表面，抢先占居病原菌定居和复制的靶位，并尽可能早地刺激肠道黏膜产生基础免疫。所以，研制出一种新颖性、高效、安全的新型口服用优势益生菌重组载体菌产品研发和市场应用有极强的国际竟争力。

发明内容

为了解决现有技术中仍然大量使用抗生素控制禽源大肠杆菌病、沙门氏菌等疾病的缺陷，本发明提供了一种鸭源大肠杆菌益生菌菌株及其筛选制备方法与用途，实现的目的为，可以减少抗生素药物的使用，避免细菌耐药菌株的产生，减少药物残留，保证畜产品安全，促进人类的健康具有重要的意义。

为了实现上述目的，本发明提供的一种鸭源大肠杆菌益生菌菌株，所述菌株的染色体基因组缺失asd基因，所述缺失的asd基因序列如SEQUENCE NO.1所示，外源转入重组质粒pYA-fimA，该菌株的保藏号为GDMCC NO：60693, 分类名称为：Escherichia coli，该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期：2019年6月13日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59 号楼5楼。

本发明还提供了所述鸭源大肠杆菌益生菌菌株的筛选制备方法，包括如下步骤：

(1)鸭源大肠杆菌的分离：无菌采集鸭新鲜粪便/肛拭子样本后，24 小时内划线麦康凯平板，经培养形态辨别和生理生化指标确认，分离得到大肠杆菌；

(2)将步骤(1)分离得到的大肠杆菌采用纸片扩散法进行药敏感性的筛选：所采用的药敏片为：