[发明专利]用于检测B族链球菌的引物、探针、试剂盒及检测方法在审

专利信息
申请号: 201910636659.9 申请日: 2019-07-15
公开(公告)号: CN112226522A 公开(公告)日: 2021-01-15
发明(设计)人: 郭光华;蔺皓;邹国宝;宋高尚;魏颖颖;吴茜;刘欣欣;沈江卫 申请(专利权)人: 中生方政生物技术股份有限公司
主分类号: C12Q1/689 分类号: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/46
代理公司: 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 代理人: 王欢
地址: 225300 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 用于 检测 链球菌 引物 探针 试剂盒 方法
【权利要求书】:

1.用于检测B族链球菌的引物、探针,其特征在于,由SEQ ID NO:1~2所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针组成。

2.根据权利要求1所述的引物、探针,其特征在于,

SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团FAM,3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1。

3.权利要求1或2所述的引物、探针在制备用于检测B族链球菌的试剂盒中的应用。

4.用于检测B族链球菌的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1或2所述的引物、探针。

5.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,还包括对内参基因HBB检测的引物对和探针;

所述针对内参基因HBB检测的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:4~5所示;

所述针对内参基因HBB检测的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

6.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团ROX,3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2。

7.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,还包括荧光定量PCR检测试剂和/或样本提取试剂;

所述荧光定量PCR检测试剂包括qPCR Master Mix酶混合液、qPCR Master Mix反应缓冲液;所述qPCR Master Mix酶混合液包括Taq酶和UNG酶,所述Taq酶为Anstart Taq DNA聚合酶,所述UNG酶为尿嘧啶-N-糖基化酶;

所述样本提取试剂包括NaOH、TritonX-100和TE缓冲液。

8.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,还包括阳性对照和/或阴性对照;

发明的阴性对照品为灭菌水;

本发明的阳性对照品为含有B族链球菌靶基因和HBB基因片段的质粒溶液。

9.B族链球菌的检测方法,其特征在于,以权利要求3~8任一项所述的试剂盒,对待测样品DNA进行实时荧光定量PCR检测,产生S型扩增曲线则为阳性。

10.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于,所述实时荧光定量PCR的体系包括:

所述实时荧光定量PCR的程序包括:

50℃2分钟;

95℃5分钟预变性;

95℃15秒→60℃35秒,45个循环。

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