[发明专利]一种总胆汁酸检测试剂

说明书

本发明公开了一种总胆汁酸检测试剂，包括R1反应液和R2反应液，其中，所述R1反应液包括第一缓冲液、第一稳定剂、第一表面活性剂、第一防腐剂和Thio‑NAD，所述R2反应液包括第二缓冲液、第二稳定剂、第二表面活性剂、第二防腐剂、3α‑类固醇脱氢酶和NADH，所述第一稳定剂包括1，2‑二硫代苏糖醇和EDTA。本发明通过在R1反应液中添加包括1，2‑二硫代苏糖醇和EDTA在内的复合稳定剂，大大增强总胆汁酸检测试剂的稳定性。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，更具体地说，特别涉及一种总胆汁酸检测试剂。

背景技术

总胆汁酸是在肝脏内合成，被肝细胞分泌进入胆汁，然后随胆汁进入肠道内，在肠道内的细菌作用下被水解成游离型的胆汁酸，其中，大部分的胆汁酸被肠道重新吸收后回到肝脏，如此循环往复，从而维持人体胆汁酸含量的相对稳定，正常人血清中胆汁酸的含量非常低，且相对稳定，当肝细胞发生病变的时候，血清中总胆汁酸的含量会明显升高，因此，血清中总胆汁酸含量通常可以同时反映肝脏细胞分泌、合成、损伤三个方面的状态。目前，对于总胆汁酸的检测方法主要有酶比色法和循环酶法，临床上常用循环酶法对总胆汁酸的浓度进行检测。

循环酶法检测血清中的胆汁酸的原理主要如下：

血清中的胆汁酸被3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)及β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇，同时β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)被还原成β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)，新生成的3-酮类固醇在3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)存在下，还原成胆汁酸，同时β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)氧化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(NAD)。通过上述原理，血清中微量的胆汁酸在多次酶循环的过程中被放大，同时使生成的β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)扩增。通过检测β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)吸光度的变化率，可求得样本中胆汁酸的含量。

在检测总胆汁酸的过程中，由于NADH在溶液中很难长时间的保存，且NADH作为循环酶法中主要的物质，使得总胆汁酸检测试剂盒的稳定性都比较差，尤其是随着试剂放置时间的延长，试剂的稳定性下降造成试剂的检测灵敏度降低，在使用上具有一定的局限性，因此研究开发一种稳定性好的总胆汁酸检测试剂盒显得尤为重要。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明提供一种稳定性好的总胆汁酸检测试剂。

技术方案如下：

一种总胆汁酸检测试剂，包括R1反应液和R2反应液，其中，

所述R1反应液包括第一缓冲液、第一稳定剂、第一表面活性剂、第一防腐剂和Thio-NAD；

所述R2反应液包括第二缓冲液、第二稳定剂、第二表面活性剂、第二防腐剂、3α-类固醇脱氢酶和NADH；

所述第一稳定剂包括1，2-二硫代苏糖醇和EDTA。

上述的总胆汁酸检测试剂，优选的，所述第一稳定剂还包括甘氨酸、甘露醇、蔗糖和海藻糖中的至少一种。

上述的总胆汁酸检测试剂，优选的，所述1,2-二硫代苏糖醇的浓度范围为6.0g/L～10.0g/L。

上述的总胆汁酸检测试剂，优选的，所述EDTA的浓度范围为4.0g/L～10.0g/L。

上述的总胆汁酸检测试剂，优选的，所述第二稳定剂包括聚氧乙烯十二烷基醚和β-环糊精。

上述的总胆汁酸检测试剂，优选的，所述第二稳定剂为BSA、甘露醇、甘氨酸、蔗糖、聚氧乙烯十二烷基醚和β-环糊精中的至少两种。