[发明专利]一种重组质粒、重组质粒制备方法、重组杆粒及其应用

权利要求书

1.一种重组质粒，其特征在于：所述重组质粒基因组整合了IBDV VP2成熟蛋白的基因序列、GP67蜂毒信号肽基因、His标签蛋白基因序列和终止密码子，且保持了IBDV VP2成熟蛋白的开放阅读框编码基因和GP67蜂毒信号肽基因各自的生物学功能。

2.如权利要求1所述的一种重组质粒，其特征在于：所述VP2成熟蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示序列；所述GP67蜂毒信号肽基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示序列；所述His标签蛋白基因序列如SEQ ID NO.3所示序列。

3.如权利要求1或2所述的重组质粒的制备方法，其特征在于：由质粒pFastbac1载体质粒在其BamH 和EcoR 酶切位点酶切位点间插入SEQ ID NO.2 所示序列得到pFastbac1-GP67重组质粒，之后在pFastbac1-GP67重组质粒的Kpn和EcoR酶切位点间插入SEQ IDNO.1所示序列获得pFastbac1-GP67-VP2重组质粒。

4.如权利要求3所述的重组质粒的制备方法，其特征在于：所述His标签蛋白基因序列位于合成所述VP2蛋白编码基因的下游引物的3'端中。

5.一种重组杆粒，其特征在于：由权利要求4所述pFastbac1-GP67-VP2重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞获得rBacmid-VP2重组杆粒。

6.如权利要求5所述的一种重组杆粒的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）将rBacmid-VP2重组杆粒采用脂质体转染法转染至Sf9细胞中获得重组杆状病毒，；

2）对获得的重组杆状病毒进行多次扩增，以获得高滴度高感染力的重组杆状病毒，用重组杆状病毒感染大量sf9细胞以量产化获得重组蛋白；

3）将所述重组蛋白保存至蛋白保存液中为后续生产提供原材料，所述蛋白保存液中含有10 mM CaCl₂和Tris-Hcl溶液。

7.如权利要求6所述的一种重组杆粒的应用，其特征在于，所述重组蛋白用于生产亚单位疫苗。

8.如权利要求6所述的一种重组杆粒的应用，其特征在于，所述重组蛋白用于生产ELISA试剂盒和免疫胶体金检测试纸条。